阪崎肠杆菌试剂盒PCR-荧光探针法

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

心肌细胞生长添加物CMGS盐酸西替利嗪（标准品）质量规格：含量测定Cetirizine

ISK (Ishikawa)细胞，人内膜癌细胞 小鼠小胶质瘤细胞,Bv-2细胞 心肌成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)盐酸雷莫司琼（标准品）质量规格：含量测定Ramosetron

GH3(大鼠垂体瘤细胞) 5×106cells/瓶×2**度酸（标准品）质量规格：含量测定Etodolac

HOB Pellet 人成骨细胞团块 > 1 mio.cells 人脉络丛内皮细胞总RNAHCPEC NA（标准品）质量规格：含量测定Amfebutamone

CL-0010786-O(人肾透明细胞癌细胞)5×106cells/瓶×2盐酸右美托咪定质量规格：≥99%,BRDexmedetomidine HCl
杂交瘤(B类);Z51B3C10H12A12G2F7B5 小鼠表皮角质形成细胞完全培养基 100mL醋甲唑胺(标准品)Methazolamide质量规格：HPLC≥99.0%,标准品

BRL 3A, 大鼠肝正常细胞 Rattus齐拉西酮Ziprasidone质量规格：含量≥99%

IL1RAPL2 Others Human 人 IL1R9 / IL1RAPL2 / IL1 Receptor 9 人细胞裂解液 (阳性对照) 塞曲司特/西拉达司/塞拉司特Seratrodast质量规格：含量≥98.0%

人角膜细胞裂解物HKL美托拉宗Metolazone质量规格：>99%,BR

CD86 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD86 / B7-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 美托拉宗(标准品)Metolazone质量规格：HPLC≥99.0%,标准品
LTEP-a-2细胞，肺腺癌细胞 人喉表皮样癌细胞,HEp-2细胞 tTA基因修饰的小鼠胰腺癌细胞(B类);Pan02-CAG-tTA-4C55-胞苷二嶙酸单钠盐shēng huà shì jì容量：100克

杂交瘤(B类);Z1510A2G6A2F8碱蓝6B Alkali blue 6B 1324-80-7 10G 通用试剂

INSR Others Human 人 Insulin Receptor / INSR / CD220 ( Short Isoform ) 人细胞裂解液 (阳性对照) D-2,3-二安基炳醋言醋盐 H-D-DcP-OH HCL 6018-26-0

人葡萄膜色素细胞;UMpH10.0STANDARDpH标准液10.0生物技术级蓝色无混浊溶液RTsigma

人气管上皮细胞(HTEpiC)(5×105 )67-68-5二甲亚砜 99.7+%Dimetxyl sulfoxide
猪白介素17(IL-17)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Stigmasterol  83-48-7  中文名：豆甾醇  分子式：C29H48O  度：97.0%  关键词：  中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

猪白介素13(IL-13)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Stigmasterol glucoside  中文名：  分子式：C35H58O6 

猪白介素12(IL-12/P40)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tenofovir  中文名：泰诺福韦  分子式：C9H14N5O4P  度：98.0%

猪白介素12（IL-12）ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Tenacissoside I  中文名：通关藤苷I  分子式：C44H62O14 

猪白介素10elisa试剂盒   猪白介素10试剂盒   规格型号：96T/48T   猪白介素10试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：猪白介素10试剂盒、猪白介素10eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Teriflunomide  中文名：特立氟胺  分子式：C12H9F3N2O2
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
阪崎肠杆菌试剂盒PCR-荧光探针法三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。