储存条件: 仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法 1. 血清:使用不含热原和内的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。 3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
产品名称
呼吸道合胞病毒B组荧光PCR检测试剂盒
规格
详见说明
货号
XG-R64450
产品特点: 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断 灵敏度高:可检测个位拷贝数的基因 特异性高:有效避免非特异性扩增的出现 稳定性高:复孔间差异小,实验结果重复性强 扩增性能优:扩增效率高,荧光信号强
PCR实验方法步骤: 方法 1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤高压。 5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。 6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压。 7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
检测步骤: 一、 试剂的准备 从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。 设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表: 试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量 荧光PCR反应液 14µL N×14µL 酶混合物 1 µL N×1 µL 总量 15 µL N×15µL (1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。 7.2 qPCR反应条件 将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。 推荐循环条件: 1循环 50℃ for 2 min 预变性 1循环 95℃ for 10 min PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec 在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
5-NT 小鼠5核苷酸酶ELISA检测试剂盒 5-NT ELISA Kit α2-AP 小鼠α2抗纤溶酶ELISA检测试剂盒 α2-AP ELISA Kit CA724 小鼠肿瘤标志物ELISA检测试剂盒 CA724 ELISA Kit C-Peptide 小鼠C肽ELISA检测试剂盒 C-Peptide ELISA Kit Big ET 小鼠大内皮素ELISA检测试剂盒 Big ELISA Kit HIS 小鼠组胺ELISA检测试剂盒 HIS ELISA Kit TXB2 小鼠血栓素B2ELISA检测试剂盒 TXB2 ELISA Kit ISR-β 小鼠胰岛素受体βELISA检测试剂盒 ISR-β ELISA Kit INH-B 小鼠抑制素BELISA检测试剂盒 INH-B ELISA Kit AQP-2 小鼠水通道蛋白2ELISA检测试剂盒 AQP-2 ELISA Kit 250mL Nylon Membrane Stripping Buffer,10X(尼龙膜剥离缓冲液,10X) Nylon Membrane Stripping Buffer,10X 常温保存 呼吸道合胞病毒B组荧光PCR检测试剂盒致泻大肠埃希氏菌生化套装 8种*2套/盒 2 ug pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP(380) pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP(380) 低温运输,-20℃保存 麦芽浸膏汤 Malt Extract Broth 200g 100g α- 乳糖 α-Lactose 室温干燥保存 50T 麻风杆菌PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 5mL 尿道上皮细胞生长因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存 100mL AMPSO Buffer,0.2M,pH9.0 AMPSO Buffer,0.2M,pH9.0 常温保存 50次 DNA电泳分子量标准(50-500bp) DNAMETER 4℃保存 2 ug SD1211- 2 SD1211- 2 低温运输,-20℃保存 检定4号(PH6.5-6.6) Antibiotic Agar No.4 250g