使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 荧光定量PCR试剂盒
规格: 50T
货号:BH-8010813
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细���中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
冠突曲霉染色体分离调节蛋白1抗体Anti-COL1A1 Antibody组蛋白脱乙酰基酶7(HDAC7)ELISA试剂盒
Mucilaginibacter mallensis复制激活因子C1抗体Anti-COL3A1 Antibody组蛋白脱乙酰基酶6(HDAC6)ELISA试剂盒
酿酒酵母复制激活因子C2抗体Anti-COL3A1 Antibody组蛋白脱乙酰基酶5(HDAC5)ELISA试剂盒
孟氏假单胞菌B受体相关蛋白抗体Anti-COL2A1 Antibody组蛋白脱乙酰基酶4(HDAC4)ELISA试剂盒
透孢犁头霉磷酸化急性髓白血病1蛋白抗体Anti-COL3A1 Antibody组蛋白脱乙酰基酶3(HDAC3)ELISA试剂盒
黑腐皮壳菌受体结合丝氨酸苏氨酸激酶3抗体Anti-COL4A1 Antibody组蛋白脱乙酰基酶2(HDAC2)ELISA试剂盒
卫矛拟盘多毛孢胰岛素单克隆抗体Anti-COL4A2 Antibody组蛋白脱乙酰基酶11(HDAC11)ELISA试剂盒
细链格孢磷酸化视网膜母瘤相关蛋白1抗体Anti-COMT Antibody组蛋白脱乙酰基酶10(HDAC10)ELISA试剂盒
苹果链格孢磷酸化视网膜母瘤相关蛋白1抗体Anti-COMP Antibody组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC1)ELISA试剂盒
小青霉精神分裂症相关蛋白9抗体Anti-COL4A1 Antibody(PB0126)组蛋白H4(H4)ELISA试剂盒
双孢蘑菇周期依赖性激酶抑制相关蛋白抗体Anti-COL4A1 Antibody组蛋白H3(H3)ELISA试剂盒
大肠埃希菌RNA结合蛋白38抗体Anti-COMT Antibody(PB0568)组蛋白H2B(H2B)ELISA试剂盒
青色链霉菌松弛肽/松弛素抗体Anti-COMT Antibody组蛋白H2A(H2A)ELISA试剂盒
褐疣柄牛肝菌肾酶抗体Anti-Connexin 37/GJA4 Antibody组蛋白H1(H1)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌环指蛋白20抗体Anti-Connexin 43/GJA1 Antibody组-N-甲基转移酶(HNMT)ELISA试剂盒
新城疫病RAN结合蛋白1抗体Anti-Connexin-40(GJA5) Antibody组H4受体(HRH4)ELISA试剂盒
荧光定量PCR试剂盒人天青杀素1(AZU1)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LIN7A ELISA Kit磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体
人β淀粉样蛋白40(Aβ40)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LIN28B ELISA Kit磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2抗体
人β淀粉样蛋白42(Aβ42)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LITAF ELISA Kit酸性神经酰酶1抗体
人B活化因子受体(BAFFR)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LIN7B(Protein lin-7 homolog B) ELISA Kit粘附调节分子1抗体
人Bcl-2样蛋白1(BCL2L1/BCL-X)酶联疫吸附测定试剂盒Human Liprin alpha 1 ELISA Kit气味结合蛋白抗体
人性/通透性增加蛋白(BPI)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LIV-1 ELISA Kit乙脱氢酶2抗体
人成纤维生长因子4(FGF4)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LMBR1L ELISA Kit膜粘连蛋白10抗体
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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