使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: RT-PCR试剂盒
规格: 50T
货号:BH-8010814
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异���程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
黑曲霉mRNA结合蛋白抗体Anti-Connexin-46(GJA3) Antibody组氨酸脱羧酶(HDC)ELISA试剂盒
裂褶菌环指蛋白126抗体Anti-COPE Antibody组氨酸丰富糖蛋白(HRG)ELISA试剂盒
木拉克酵母属小鼠抗人红单克隆抗体Anti-COX8A Antibody组氨酸丰富钙结合蛋白(HRC)ELISA试剂盒
鸡痘病视黄酸受体应答蛋白2抗体Anti-COPS5 Antibody阻抑素2(PHB2)ELISA试剂盒
茶叶枯炭疽盘孢菌*抗Rap1A抗体Anti-COPS5 Antibody(PB0521)阻抑素(PHB)ELISA试剂盒
立枯丝核菌RAS癌基因相关蛋白RAB7抗体Anti-CPA1 Antibody足盂蛋白(PCX)ELISA试剂盒
环带青霉c-Myc应答蛋白抗体Anti-CP Antibody(PB0896)棕榈酰化膜蛋白6(MPP6)ELISA试剂盒
灰平链霉菌RAS癌基因相关蛋白RAB6B抗体Anti-CPAMD8 Antibody棕榈酰化膜蛋白5(MPP5)ELISA试剂盒
文昌小单孢菌Rab蛋白GTP酶激活蛋白1抗体Anti-CP Antibody(PB0897)棕榈酰化膜蛋白2(MPP2)ELISA试剂盒
产肠素大肠埃希氏菌结肠癌相关基因蛋白抗体(resistin-like β)Anti-CPB2 Antibody自噬相关16样蛋白1(ATG16L1)ELISA试剂盒
古巴光盖伞*磷酸化原癌基因c-Met相关酪氨酸激酶抗体Anti-CPT2 Antibody自噬/苄氯素1调节因子1(AMBRA1)ELISA试剂盒
酿酒酵母环指蛋白6抗体Anti-CPB2 Antibody自身调节因子(AIRE)ELISA试剂盒
藤黄微球菌核糖核酸酶6抗体Anti-CPM Antibody滋养层特异性糖蛋白(TPBG)ELISA试剂盒
芽胞杆菌磷酸化Ras特异性鸟嘌呤核苷酸释放因子1Anti-CPT1B Antibody(PB0512)转运蛋白3(TNPO3)ELISA试剂盒
彩色豆马勃磷酸化周期检查控制蛋白质抗体Anti-CR1 Antibody转运蛋白2(TNPO2)ELISA试剂盒
死亡谷芽孢杆菌磷酸化周期检查控制蛋白质抗体Anti-CRB1 Antibody转运蛋白1(TNPO1)ELISA试剂盒
RT-PCR试剂盒人成纤维生长因子6(FGF6)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LMF2 ELISA Kit前梯度同源蛋白2抗体
人乳酸脱氢酶A(LDHA)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LIN7A ELISA Kit乙脱氢酶5抗体
人Bcl2同源拮抗剂1(BAK1)酶联疫吸附测定试剂盒Human LIN28B ELISA Kit通用转录因子IIA样因子抗体
人BCL2相关死亡促进因子(BAD)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LHPP ELISA Kit自噬相关蛋白4D抗体
人Bcl-2相关X蛋白(BAX)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LIN7C ELISA Kit自噬相关蛋白9A抗体
人BCL2修饰因子(BMF)酶联疫吸附测定试剂盒Human LILRA5 ELISA Kit缩酶C抗体
人自噬基因(BECN1)酶联疫吸附测定试剂盒 Human LIN7B(Protein lin-7 homolog B) ELISA Kit谷草转氨酶抗体
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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