细胞株培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
细胞处理方法:
以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考,具体操作还需要根据到货时细胞密度,细胞生长状态等具体情况,酌情处理,如需要更详细技术指导。
一.贴壁细胞
客户接收到细胞,用75%的酒精(建议配制75%酒精的水是过的)培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
显微镜观察细胞,当细胞融汇至80%左右(可以传代的情况下),细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度,培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。1000rpm,5min离心,重悬细胞。换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2 培养。
二.悬浮细胞
1. 接收到细胞,用75%的酒精(建议配制75%酒精的水是过的)培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
3. 严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒)。
5. 1000rpm,5min离心,重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基,37℃,5%CO2培养。
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)ELISA试剂盒1-甲基吡唑-4-酸频哪酯 97%4-三氟甲氧基苯 99%天狼猩红
Bcl-2样蛋白1(BCL2L1)ELISA试剂盒5-甲基吡啶-3-酸 98%苄基酮 98%DL-2氨基丁酸(>98.5%,BR)
Bcl-2相关X蛋白(BAX)ELISA试剂盒2-甲氧基吡啶-3-酸频哪酯 97%氧化铪(IV) 99.99% metals basisDL-2-羧酸(>98%,BR)
A组链球菌菌壁多糖抗体(ASP)ELISA试剂盒2-甲氧基吡啶-5-酸频哪酯 97% Standard for GCDL-苯甘氨酸(>98%,BC)
A组链球菌多糖抗原(ASP Ag)ELISA试剂盒1-BOC-吡咯-3-酸 98%溶液 AR,30-33 wt. % in absolute ethanolDL-beta-苯氨酸(>98%,BR)
A激酶PRKA锚定蛋白12(Akap12)ELISA试剂盒3-酸 97%溶液 CP,30-33 wt. % in absolute ethanolDL-肉碱盐酸盐
AT丰富结合域1A(ARID1A)ELISA试剂盒2-基-5-降烯 98%2-氨基-2-甲基-1- 97%DL-鸟氨酸盐酸盐(>98%,BC)
ATP酶(ATP)ELISA试剂盒嘧啶-5-酸 98%碳酸氢 AR,99.5% DL-(>99%,BP)
Apelin12(AP12)ELISA试剂盒吡啶-4-酸 94%无水碳酸 AR,99%甲基烯酸二甲氨乙酯(>99%,BR)
Apelin 36(AP36)ELISA试剂盒嘧啶-5-酸频哪酯 97%无水碳酸 GR,99.5%D-苹果酸(>98%,BR)
apelin 13(AP13)ELISA试剂盒2-(三氟甲氧基)苯酸 97%无水碳酸 PTDMS
apelin 12(AP12)ELISA试剂盒2,4,6-三酸 98% 无水碳酸 SPD-正亮氨酸(>99%,BC)
AP-5复合物β亚基(PP1030)ELISA试剂盒异辛酸 GCS,≥99.5% (GC)无水碳酸 99.99% metals basis盐酸多巴
Alpha-D 酚/维生素E(Alpha-D TPL)ELISA试剂盒异辛酸 CP,98.0%无水碳酸 99.995% metals basisDST
Agouti相关蛋白(AGRP)ELISA试剂盒异辛酸 >99.0% (GC)无水碳酸 ACS, ≥99.0% 2'-脱氧尿苷-5'-三磷酸三钠盐
AFG3样蛋白2(AFG3L2)ELISA试剂盒2-溴异丁酰溴 98%硝酸 AR,99.0%四氢甲基嘧啶羧酸(>98%,BR)
细胞株25羟基维生素D3检测试剂盒2,2′-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二盐 98%甲溶液 ACS,37 wt. % in H2O, 含10-15% 甲稳定剂
2-硫代噻唑烷-4-羧酸检测试剂盒4-氨基-3-羟基苯甲酸 98%京尼平甙 分析标准品,≥98%
3-硝基酪氨酸检测试剂盒亚硫酸铵 94%乙二溶液 40 wt. % in H2O (8.8 M)
3型1-磷酸鞘氨受体检测试剂盒氨基胍碳酸氢盐 分析标准品甘草酸 93%
4-羟基壬烯检测试剂盒顺式-乌头酸 分析标准品,98%氢加兰他敏 98%
5α还原酶检测试剂盒N-(4-氨酰)-L-谷氨酸 97%二氢黄酮甙 97%
5-甲基四氢叶酸检测试剂盒花生四烯酸 分析标准品,≥99.0% (GC)和厚朴酚 分析标准品
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