细胞系培养方法
传代方法 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；
生长条件 37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。
存储条件 冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。
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培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后���显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
CD146分子(CD146)ELISA试剂盒2-氯-3-甲基吡啶-5-酸 95%2-基硫 96%5'-三磷酸胞苷三钠盐
CD134分子(CD134)ELISA试剂盒2-氯吡啶-4-酸 97%乙酸硫噻唑 99%松弛素A(>98%，BR)
CD117分子(CD117)ELISA试剂盒5-氯噻吩-2-酸 97%2-(基硅)苯基三氟磺酸盐 97%松弛素C(>98%，BR)
CD10分子(CD10)ELISA试剂盒2-氯吡啶-5-酸频哪酯 98% 茶螺烷 technical, ≥90% (GC,mixture of isomers)松弛素 D(>98%，BR)
CC趋化因子受体7(CCR7)ELISA试剂盒2,6-二氟苯酸 98%二噻吩二硫 97%松弛素E(>98%，BR)
CC趋化因子受体5(CCR5)ELISA试剂盒2,6-二氟吡啶-3-酸 95%季酮酸 96%D-樟脑酸(>99%,BR)
CC趋化因子受体2(CCR2)ELISA试剂盒2,5-二酸 97%乙酸香兰素酯 98%D(+)-二苯甲酰一水(>98%，BR)
CC趋化因子受体1(CCR1)ELISA试剂盒2,4-二氟苯酸 98%异丁酸香兰素酯 ≥98%, FG己二烯二(>98%，BR)
CC趋化因子7(CCL7/MCP3/SCYA6/SCYA7)ELISA试剂盒2,5-二氟苯酸 97%香兰基丁 96%十二烯基丁二酸酐(>98%，BR)
CC趋化因子5(CCL5/D17S136E/SCYA5)ELISA试剂盒2,3-二氯吡啶-4-酸 95%香草酸 98%癸二酸(>96%，BR)
CCAAT增强子结合蛋白ε(C/EBPε)ELISA试剂盒4-(二甲基氨基)苯酸 95%反式-1,2-环己二 98%脱氢乙酸(>98%，BR)
CCAAT增强子结合蛋白δ(C/EBPδ)ELISA试剂盒2,6-二氯吡啶-3-酸 95% 1，2-环己二 99%脱羰秋水仙碱
CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)ELISA试剂盒2,5-二氯吡啶-3-酸 95%反式-1，2-环己二四乙酸,一水 99%DON素，呕吐素；脱氧雪腐镰刀菌烯(>98%(HPLC),BR)
cAMP反应元件结合蛋白(CREB)ELISA试剂盒2,5-二氯吡啶-4-酸 95%卡铂 98%第威德合金
Ca2+激活K+通道蛋白2(KCNN2)ELISA试剂盒2,6-二酸 98%反式-1.2-环己二四乙酸 98%二乙酰一肟(>98%，BR)
C4结合蛋白(C4BP)ELISA试剂盒2,4-二甲氧基嘧啶-5-酸 90%顺铂 Pt, 65%二丁基二月桂酸锡(>95%,BR)
细胞系1α羟化酶检测试剂盒偶氮荧光桃红 Dye content 90 %金雀花碱 98%
1-磷酸鞘氨检测试剂盒全反式-β-阿林胡萝卜 96%虫草素 98%
2,3-二磷酸甘油酸检测试剂盒3-氨基吡啶 分析标准品大黄酚 分析标准品，≥98%
2,5寡腺苷酸合成酶检测试剂盒氨基蝶呤 98%双醋瑞因 ≥95%（HPLC)
2,5寡腺苷酸合成酶2检测试剂盒草酸高铁铵 98%黄豆苷原 98%
20-HETE检测试剂盒杀草强 分析标准品大黄素 分析标准品，≥96.0% (HPLC)
25羟基维生素D检测试剂盒烯基, 含稳定剂铜, 97%漆黄素 98%
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
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