相对定量分析方法 ： 2-ΔΔCt 前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏差在5％以内 1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值： ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test） ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator） 2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值： ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator） 3、计算表达水平比率： 2 –ΔΔCT=表达量的比值 参数规格：
产品名称：RT-PCR试剂盒 货号：FS-205641
使用方法:
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例） 1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 段作为阳性对照。 2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。 3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。 4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。 5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。 6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。 7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
具有下列特点： 1.根据 指标的保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。 2.灵敏度比常规 PCR 高 2-3 个数量级，可以达到几百拷贝/反应。 3.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。 4.一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。 5.本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。 6.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 需要自备的器材： 1．仪器：分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL）。 2．耗材：荧光 PCR 反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水 处理的**离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、**双蒸水。
"20 μl ER-Tracker Red（内质网红色荧光探针） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 250 μg Fluo-3 AM（钙离子荧光探针） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 1 mg Fluo-3，五铵盐 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 1 mg Fura-2 AM（钙离子荧光探针） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 25 mg Fluorescein-5-maleimide Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 1 mg Fura-2，五铵盐 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 1 mg Golgi-Tracker Red（高尔基体红色荧光探针） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 10 mg Hydroxystilbamidine Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 1 mg Indo-1 AM Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 1 mg Indo-1，五铵盐 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 1 mg JC-1 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 5 mg JC-10 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 RT-PCR试剂盒 mg Lucigenin（光泽精） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 人 EGR2 基因全长ORF克隆 人 TCHP 基因全长ORF克隆 人 FSCN3 基因全长ORF克隆 人 CEP63 基因全长ORF克隆 人 FZR1 基因全长ORF克隆 人 GABRA3 基因全长ORF克隆 人 PPIL4 基因全长ORF克隆 人 ACBD5 基因全长ORF克隆 人 HSPBAP1 基因全长ORF克隆 人 PIGA 基因全长ORF克隆 人 RGS7 基因全长ORF克隆"
注意事项： 1. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。 2. 试剂Buffer AL若低温保存，易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间，也可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀，混匀后再使用。 3. 电泳检测时，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则，电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。 4. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率佳。 ?5. 为了您的**和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作