实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
兔成骨细胞分离自颅骨组织；颅骨位于脊柱上方，由23块形状和大小不同的扁骨和不规则骨组成。除下颌骨及舌骨外，其余各骨彼此借缝或软骨牢固连结，起着保护和支持脑、感觉器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。颅分脑颅和面颅两部分。脑颅位于颅的后上部，内有颅腔，容纳脑，共8块。面颅为颅的前下部分，包含眶、鼻腔、口腔等结构，构成面部的支架，共15块。成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌和矿化。骨不断地进行着重建，骨重建过程包括破骨细胞贴附在旧骨区域，分泌酸性物质溶解矿物质，分泌蛋白酶消化骨基质，形成骨吸收陷窝；其后，成骨细胞移行至被吸收部位，分泌骨基质，骨基质矿化而形成新骨；破骨与成骨过程的平衡是维持正常骨量的关键。成骨细胞培养不仅有助于了解骨形成机制、骨骼系统的分子和细胞学基础，也是筛选、生物材料开发和生物工程研究的重要手段。
组织来源
产品规格
货号
用途
颅骨组织
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X2139
仅供科研研究实验
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次；
生长特性 贴壁
细胞形态 梭形、多角形
传代特性 可传3-5代左右；3代以内状态佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
方法简介：
公司实验室分离的兔成骨细胞采用先用胰蛋白酶短时间消化、后用胶原酶反复消化制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的兔成骨细胞经ALP染色检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
含Earle平衡盐
大鼠磷脂酶A2(PL-A2)elisa检测试剂盒
猪成纤维细胞生长因子19(FGF19)elisa分析检测试剂盒
人病毒(PV)抗体(IgG)elisa分析检测试剂盒
植物直链淀粉比色法定量检测试剂盒
小鼠可溶性CD40配体(sCD40L)elisa分析检测试剂盒
大鼠12羟二十烷四烯酸(12-HETE)elisa检测试剂盒
载玻片细胞IP3R受体蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
犬S100B蛋白(S100B)elisa分析检测试剂盒
诱捕受体2抗体 DcR2
早老素γ分泌酶2抗体 PEN2
非红细胞血影脑蛋白β2/spectrin β III抗体 SPTBN2
富含亮氨酸软骨蛋白抗体 CHAD
G蛋白偶联受体78抗体 GPR78
Hermansky-Pudlak综合征蛋白3抗体 HPS3
鸟嘌呤核苷酸交换因子CLLD7抗体 CLLD7
平滑肌蛋白LMOD2抗体 LMOD2
AF750标记的NFkB诱导激酶抗体 MAP3K14/NFkB Inducing Kinase, Alexa Fluor 750 conjugated
APC-Cy7标记人CD14单克隆抗体 human CD14/APC-Cy7
精子发生相关蛋白31A2抗体 SPATA31A2
卷曲螺旋结构域蛋白89抗体 CCDC89
TBC结构域TBCD4蛋白抗体 TBC1D4
T细胞识别的鳞状细胞癌SART3抗体 SART3
唾液酸结合性球蛋白样凝集素7抗体 SIGLEC7
细胞分裂周期蛋白25C单克隆抗体 CDC25C
植物氢/钾ATP酶（H＋/K＋－ATPase）活性比色法定量检测试剂盒
兔成骨细胞人白介素22(IL-22)elisa检测试剂盒
大鼠补体片断3a(C3a)elisa检测试剂盒
ARH; ARH GENE; ARH_HUMAN; ARH1; ARH2; Autosomal recessive hypercholesterolemia protein; FHCB1; FHCB2; LDL receptor adaptor protein; Ldlrap1; Low density lipoprotein receptor adapter protein 1.
兔大隐静脉内皮细胞
小鼠脊髓微血管内皮细胞
NCI-H929人骨髓瘤细胞
E14小鼠胚胎干细胞
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；