兔腹膜间皮细胞

细胞简介：

兔腹膜间皮细胞分离自腹膜组织；腹膜是存在于高等脊椎动物腹腔中的一层黏膜，主要由间皮细胞构成，藉由结缔组织的支持所形成的一层膜状组织。腹膜包覆大部分腹腔内的器官，能分泌黏液润湿脏器的表面，减轻脏器间的摩擦。腹腔脏器的血液、和神经组织经由腹膜与外界相连；腹膜也具有吸收撞击保护内脏的效果。腹膜（peritoneum）为全身面积大、配布复杂的浆膜，由皮及少量结缔组织构成，薄而光滑，呈半透明状。衬于腹、盆腔壁内表面的腹膜称为壁腹膜（parietal-peritoneum）或腹壁薄层；覆盖腹、盆腔器表面的部分称为脏腹膜（visceral-peritoneum）腹膜或腹膜脏层。脏腹膜与壁腹膜互相延续、移行，共同围成不规则的潜在性腔隙，称为腹膜腔（peritoneal-cavity）。腹膜腔是脏、壁两层腹膜之间相互移行围成的潜在性间隙。腹膜腔内有少量浆液，在脏器活动时可减少摩擦。腹膜间皮细胞属于上皮组织中的单层扁平上皮，是覆盖于腹膜表面的一层细胞。间皮细胞是构成间皮的细胞，正常大小约为15-25微米，细胞常呈圆形或者卵圆形。其功用是提供润滑，使器官与器官、器官与胸膜与腹膜间都能得到良好的保护，不会互相磨损受伤。而间皮所生产的润滑和保护作用就是靠间皮细胞所分泌的物质来达成，分泌物多半为细胞外基质、玻尿酸类物质。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传1-2代

消化液：0.25%胰蛋白酶

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔腹膜间皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

方法简介：

实验室分离的兔腹膜间皮细胞采用混合胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：

实验室分离的兔腹膜间皮细胞经PCK、Vimentin荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。

实验具体步骤：

（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净；
（3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中；
（4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，

利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）

镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的
盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；

（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；

根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；

实验方法:

一、悬浮细胞的分离方法
组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。
二、实体组织材料的分离方法
对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。

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