实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
兔结肠成纤维细胞分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌），外膜（纤维膜或浆膜）。结肠成纤维细胞主要分布于外膜（纤维膜或浆膜）结缔组织内。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的结肠成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
组织来源
产品规格
货号
用途
结肠
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X2057
仅供科研研究实验
培养信息：
培养基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：成纤维细胞样
传代特性：可传3代左右
消化液：0.25%胰蛋白酶
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
兔结肠成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。
方法简介：
实验室分离的兔结肠成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测：
实验室分离的兔结肠成纤维细胞经Vimentin荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
小鼠肿瘤坏死因子样细胞凋亡弱诱导因子(TWEAK)elisa检测试剂盒
小鼠核因子κB受体活化剂配体(RANKL)elisa检测试剂盒
大鼠CXC趋化因子配体16(CXCL16)elisa分析检测试剂盒
NEUROG基因甲基化程度定量分析试剂盒盒
人B细胞活化因子(BAFF)elisa分析检测试剂盒
小鼠肾上腺素能受体α1A(ADRα1A)elisa检测试剂盒
大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)elisa分析检测试剂盒
通用型二氧化碳（CO2）浓度酶偶联反应比色法定量检测试剂盒
人P0蛋白抗体(IgG)elisa分析检测试剂盒
诱捕受体3抗体 DcR3
早老素γ分泌酶抗体 APH1a
非活性双特异性磷酸酶抗体27抗体 Inactive DUSP27
富含亮氨酸样酸性核蛋白抗体 LANPL
G蛋白偶联受体7抗体 GPR7
Hermansky-Pudlak综合征蛋白4抗体 HPS4
鸟嘌呤核苷酸交换因子FARP2抗体 FARP2
平滑肌蛋白抗体 Smoothelin
AF750标记的p53正向细胞凋亡调控因子抗体 BBC3/PUMA, Alexa Fluor 750 conjugated
APC-Cy7标记人CD16单克隆抗体 human CD16/APC-Cy7
精子发生相关蛋白5样蛋白1抗体 SPATA5L1
卷曲螺旋结构域蛋白8抗体 CCDC8
TBC结构域的蛋白激酶样蛋白抗体 HSPC302/TBCK
T细胞识别的鳞状细胞癌抗原抗体 SART1
唾液酸结合性球蛋白样凝集素抗体 SIGLEC10
细胞表面球蛋白样转录因子2重组兔单克隆抗体 LILRB1
鸡HSP27抗体(IgG)ELISA ki
兔结肠成纤维细胞冰冻切片组织CDK6蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
小鼠Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)elisa检测试剂盒
A2MR; Alpha 2 macroglobulin receptor; alpha 2MR; APOER; Apolipoprotein E receptor; APR; CD 91; CD91; CD91 antigen; Low density lipoprotein receptor related protein 1; Low density lipoprotein related protein 1; LRP 1; LRP 515; LRP 85; LRP; LRP ICD; LRP1 protein; LRP515; LRP1_HUMAN.
兔结肠平滑肌细胞
小鼠肝内胆管上皮细胞
SJSA-1人骨肉瘤细胞
H9c2(2-1)（大鼠心肌细胞）
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；