实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料,可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层,这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料,由于细胞间结合紧密,为了使组织中的细胞充分分散,形成细胞悬液,可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。其中,机械分散法的特点是简便、快速,但对组织机械损伤大,而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块(或糊状),应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动,使团块膨松,由块状变成絮状,此时再采用机械法,用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡,使细胞团块得以较充分的分散,制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液,接种培养后,细胞容易贴壁生长。
细胞简介:
兔晶状体上皮细胞分离自晶状体组织;晶状体源自胚胎发育外胚层,仅含有上皮细胞及其产物,晶状体囊膜作为屏障将晶状体与其它类型细胞完全分开;因而,晶状体上皮细胞培养既无神经和血管组织的干扰,又不受其它类型细胞如成纤维细胞的污染,保证了培养中细胞成分的单一性。晶状体上皮细胞主要负责调节晶状体的生理平衡,包括电解质和液体的输送。在正常的发育过程中,晶状体上皮细胞分化和成熟,然后迁移到晶状体内部,产生晶体蛋白,自身也拉长而变成晶状体纤维细胞,并终失去细胞核和其它的细胞器。研究表明,晶状体上皮细胞的分化和极化受到了眼部液体中的生长因子的调控,包括表皮生长因子和胰岛素等。细胞贴壁后为扁平不规则多角形,呈单层生长、连成膜状。晶状体上皮细胞是紧密贴附于晶状体前囊内表面的单层上皮细胞,其异常增殖和分化与白内障和后囊混浊的发生密切相关,体外培养是研究其生长规律的主要手段。
组织来源
产品规格
货号
用途
晶状体组织
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X2219
仅供科研研究实验
培养信息:
包被条件 鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 上皮细胞样
传代特性 可传2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
方法简介:
公司实验室分离的兔晶状体上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测:
公司实验室分离的兔晶状体上皮细胞经BFSP2(晶状体蛋白)荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品:
CTGFELISAKit
大鼠Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)elisa分析检测试剂盒
PⅢCP ELISA Kit
人钙卫蛋白elisa分析检测试剂盒
HumanCalprotectinELISAkit
小鼠抗环胍氨酸肽抗体(Anti-CCP-antibody)elisa检测试剂盒
大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)elisa检测试剂盒
总胆汁酸(TBA)定量检测试剂盒
人P16elisa检测试剂盒
TBC结构域的蛋白激酶样蛋白抗体
HSPC302/TBCK
2-氨基乙硫醇双加氧酶抗体
ADO
山羊甲状腺素(T4)elisa检测试剂盒免费代测
乳品三聚氰胺快速显色定性检测试剂盒(家用型/工业型)
活体细胞线粒体膜通道孔(MPTP)红色荧光(TMRM)检测试剂盒
大鼠脂多糖(LPS)elisa检测试剂盒
PELO蛋白抗体
PELO
FLJ36492蛋白抗体
CCDC144B
转录中介因子Tif1γ抗体 Anti-TIF1 gamma/Trim33
凋亡相关蛋白6抗体 Anti-PDCD6/ALG2
磷酸化蛋白激酶9抗体 Anti-phospho-PTK9/TWF1(Tyr321)
丝氨酸蛋白酶抑制剂B10抗体 Anti-SERPINB10
罗丹明标记的驴抗人IgG H&L
兔晶状体上皮细胞Donkey Anti-Human IgG H&L / RBITC
突触融合蛋白结合蛋白5抗体
Cytoplasmic dynein 1 intermediate chain 2; Cytoplasmic dynein intermediate chain 2; Dynein intermediate chain 2, cytosolic; DH IC-2; DC1I2_HUMAN; DNCI2; DNCIC2; Dynein cytoplasmic intermediate polypeptide 2.
兔卵巢颗粒细胞
小鼠肝间质细胞
SK-HEP-1人肝腹水腺癌细胞
HACAT+LUC人永生化表皮细胞荧光素酶标记
实验具体步骤:
(1)动物福利:小鼠麻醉牺牲/处死,或者断颈处死;
(2)小鼠:可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次,或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min,然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净; (3)取出心脏组织:用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔,取出心脏组织,置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中; (4)组织:在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二,充分洗涤里边的血液,/3次,每次5min; (5)破碎组织:使用眼科钳或者剪刀,将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块;(备注:如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min,
利于后期细胞从组织块中爬出来,同时能够消除部分结缔组织等)
镊子将组织块种植于培养皿中(备注:破碎组织块可能还含有液体,可以在一个无菌培养皿底沾几下,把液体);种植完成后,可以将培养皿正置3-5小时,然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜(也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜);
(7)培养基培养:将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基,然后在恒温潮湿细胞培养箱(37℃,5% CO2)培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况,一般3-5 day能够达到传代的爬出效率;
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中;