实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
兔视网膜神经节细胞分离自视网膜组织；视网膜居于眼球壁的内层，是一层透明的薄膜。视网膜由色素上皮层和视网膜感觉层组成，两层间在病理情况下可分开，称为视网膜脱离。色素上皮层与脉络膜紧密相连，由色素上皮细胞组成，它们具有支持和营养光感受器细胞、遮光、散热以及再生和修复等作用。组织学上视网膜分为10层，由外向内分别为：色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜、外颗粒层、外丛状层、内颗粒层、内丛状层、神经节细胞层、神经纤维层、内界膜。视网膜内层为衬于血管膜内面的一层薄膜，有感光作用；后部鼻侧有一视神经。视网膜上的感觉层是由三个神经元组成。神经元是视细胞层，专司感光，它包括锥细胞和杆细胞。视杆细胞主要在离中心凹较远的视网膜上，而视锥细胞则在中心凹处多。层叫双节细胞，约有10到数百个视细胞通过双节细胞与一个神经节细胞相联系，负责联络作用。第三层叫节细胞层，专管传导。视网膜是一层菲薄的但又非常复杂的结构，它贴于眼球的后壁部，传递来自视网膜感受器冲动的神经纤维跨越视网膜表面，经由视神经到达出口。视网膜的分辨力是不均匀的，在黄斑区，其分辨能力强。视网膜神经节细胞贴壁后呈单层排列，部分细胞聚集成团，细胞呈圆形或椭圆形，核圆且相对透明，有些细胞膜上伸出短而小的突起；该细胞为高度分化细胞，在体外属于不增殖群。视网膜神经节细胞是青光眼病理性损害的主要细胞，视网膜神经节细胞的死亡可导致视功能不可逆损伤，研究视网膜神经节细胞损害的细胞学和分子生物学机制有利于青光眼发病机制的研究。
组织来源
产品规格
货号
用途
视网膜
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X2242
仅供科研研究实验
培养信息：
包被条件：PLL（0.1mg/ml）
培养基：基础培养基，含FBS、B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：神经元细胞样
传代特性：属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液：0.25%胰蛋白酶
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
兔视网膜神经节细胞体外培养周期有限；建议使用配套的生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。
方法简介：
实验室分离的兔视网膜神经节细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法，结合视网膜神经节细胞培养基培养和化学试剂抑制法筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测：
实验室分离的兔视网膜神经节细胞经CD90荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
植物DNA甲基转移酶（MET）总活性酶连续循环比色法
猪皮质抑素/皮质醇稳定蛋白(CORT)elisa检测试剂盒免费代测
大鼠胃动蛋白1(GKN1)elisa检测试剂盒
体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP2E1（NPH）活性
小鼠Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)elisa检测试剂盒
小鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)elisa检测试剂盒
大鼠促肾上腺皮质受体(ACTHR)elisa检测试剂盒
体液一氧化氮（NO）活性比色法定量检测试剂盒
人丙酮酸脱氢酶E1(PDH E1)elisa检测试剂盒免费代测
锌指蛋白229抗体 ZNF229
锌指蛋白619抗体 ZNF619
表皮生长因子受体抗体 EGFR
叉头蛋白O4抗体 FOXO4
DNA 修复蛋白补充 XP-A 细胞抗体 XPA
DYX1C1蛋白抗体 DYX1C1
磷酸化非受体型蛋白磷酸酶7抗体 phospho-PTPN7 (Ser246)
磷酸化磷脂酰肌醇激酶抗体 phospho-PIK3R1 (Tyr368)
转运蛋白2抗体 TNPO2
组蛋白赖氨酸去甲基化酶PHF8重组兔单克隆抗体 PHF8
核酸内切酶结构域蛋白1抗体 ENDOD1
黑色素瘤相关抗原D4抗体 MAGD4
ORC6蛋白抗体 ORC6
PE-Cy5标记人CD16单克隆抗体 human CD16/PE-Cy5
诱导分化相关蛋白2抗体 GDAP2
视网膜钠/钾/钙交换体2抗体 NCKX2
人骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)elisa分析检测试剂盒
兔视网膜神经节细胞组织5－焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶（mevalonate 5-pyrophosphate decarboxylase）活性比色法定量检测试剂盒
小鼠维生素K1(VK1)elisa分析检测试剂盒
Adipocyte differentiation inhibitor protein; Brevideltin; Delta like 1 homolog; Delta like homolog; Delta like protein; Delta1; DLK 1; DLK; DLK-1; Dlk1; DLK1_HUMAN; FA 1; FA1; Fetal antigen 1; pG2; Preadipocyte factor 1; Pref 1; Pref; Pref1; Pref-1; Protein delta homolog 1; Secredeltin; ZOG; Delta1; PREF1.
兔视网膜微血管内皮细胞
兔主动脉平滑肌细胞
thp-1人单核细胞白血病细胞
HEC265人内膜腺癌细胞
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；