兔下丘脑神经元细胞

细胞简介：

兔下丘脑神经元细胞分离自下丘脑；下丘脑又称丘脑下部，位于大脑腹面、丘脑的下方，是调节内脏活动和活动的较神经所在。下丘脑自前向后可分三部﹐即前部（又名视前区和视上区）﹑中部（结节区）和后部（体区）。下丘脑具有许多细胞核团和纤维束﹐与神经系统的其它部位具有密切的相互联系。它不仅通过神经和血管途径调节脑垂体前﹑后叶的分泌和释放﹐而且还参与调节自主神经系统﹐如控制水盐代谢﹑调节体温﹑摄食﹑睡眠﹑生殖、内脏活动以及情绪等。下丘脑神经元与来自其他部位的神经纤维有广泛的突触联系，可以接受很多神经冲动，为系统和神经系统的中心。它们能调节垂体前叶功能，合成神经垂体及控制自主神经和植物神经功能。故提取下丘脑神经元进行体外培养，建立下丘脑神经元体外实验平台具有重要意义。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml）

培养基：含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：神经元细胞样

传代特性：属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液：0.25%胰蛋白酶

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔下丘脑神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

方法简介：

实验室分离的兔下丘脑神经元细胞采用胰蛋白酶消化法结合神经元培养基培养、化学试剂抑制法筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：

实验室分离的兔下丘脑神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。

实验具体步骤：

（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净；
（3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中；
（4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，

利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）

镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的
盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；

（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；

根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；

实验方法:

一、悬浮细胞的分离方法
组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。
二、实体组织材料的分离方法
对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。

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