实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
兔小肠隐窝上皮细胞分离自小肠组织；小肠位于腹中，上端接幽门与胃相通，下端通过阑门与大肠相连，是食物消化吸收的主要场所。小肠盘曲于腹腔内，上连胃幽门，下接盲肠，分为十二指肠、空肠和回肠三部分。小肠内消化是至关重要的，因为食物经过小肠内胰液、胆汁和小肠液的化学性消化及小肠运动的机械性消化后，基本上完成了消化过程，同时营养物质被小肠粘膜吸收了。小肠管壁由粘膜、粘膜下层、肌层和浆膜构成。其结构特点是管壁有环形皱襞，粘膜有许多绒毛，绒毛根部的上皮下陷至固有层，形成管状的肠腺，其开口位于绒毛根部之间。绒毛和肠腺与小肠的消化和吸收功能关系密切；构成肠腺的细胞有柱状细胞、杯状细胞、潘氏细胞和未分化细胞。柱状细胞和细胞与绒毛上皮相似，接近绒毛的柱状细胞与吸收细胞相似，绒毛深部的柱状细胞微绒毛少而短，不形成纹状缘。小肠有三种功能即消化、吸收和分泌及运动功能，其中以吸收和分泌功能为主。小肠腔面的环行皱襞从幽门附近开始出现，在十二指肠末段和空肠头段极发达，向下逐渐减少和变矮，至肠中段以下基本消失。粘膜表面还有许多细小的肠绒毛，是由上皮和固有层向肠腔突起而成，形状不一，以十二指肠和空肠头段。绒毛于十二指肠呈叶状，于空肠呈指状，于回肠则细而短。环行皱襞和绒毛使小肠表面积扩大20-30倍，绒毛根部的上皮下隐至固有层形成管状的小肠腺，又称肠隐窝，故小肠腺与绒毛的上皮是连续的，小肠腺直接开口于肠腔。
组织来源
产品规格
货号
用途
小肠
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X2053
仅供科研研究实验
培养信息：
包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：上皮细胞样
传代特性：可传1-2代
消化液：0.25%胰蛋白酶
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
兔小肠隐窝上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。
方法简介：
实验室分离的兔小肠隐窝上皮细胞采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测：
实验室分离的兔小肠隐窝上皮细胞经Cytokeratin-18荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
猪白介素18（IL－18）elisa检测试剂盒
小鼠结合珠蛋白(Hpt)elisa检测试剂盒
大鼠丙二酰辅酶A脱羧酶(MLYCD)elisa检测试剂盒
冰冻切片蔗糖酶活性染色试剂盒
人白介素19(IL-19)elisa分析检测试剂盒
小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)elisa检测试剂盒
大鼠蛋白聚糖4(PRG4)elisa检测试剂盒
组织半胱-5（CASPASE-5）活性荧光定量检测试剂盒
人穿孔素/成孔蛋白(PRF1/PFP)elisa检测试剂盒免费代测
AF750标记的TRIM31抗体 TRIM31, Alexa Fluor 680 conjugated
APC-Cy7标记人CD1a单克隆抗体 human CD1a/APC-Cy7
精子发生相关蛋白6抗体 SPATA6
卷曲螺旋结构域蛋白90A抗体 CCDC90A
TBC结构域家族D12蛋白抗体 TBC1D12
T细胞识别鳞状细胞癌抗原2抗体 SART2
唾液酸酶3抗体 Sialidase 3
味觉受体蛋白家族2亚基16抗体 TAS2R16
HEATR3蛋白抗体 HEATR3
IQCJ蛋白抗体 IQCJ
配对盒基因9抗体 PAX9
桥粒斑菲素蛋白2抗体 Plakophilin 2
富含半胱氨酸蛋白3抗体 CSRP3
钙结合蛋白Calponin抗体 Calponin 1 + 2 + 3
抑癌蛋白EZH2抗体 EZH2
真核肽链释放因子3a/eRF3抗体 Transition Protein 1
降钙素(CT)elisa检测试剂盒
兔小肠隐窝上皮细胞冰冻切片组织钙ATP酶SERCA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒
小鼠白介素2(IL2)elisa检测试剂盒
Cadherin family member 15; CDHF15; CDHR10; FAT tumor suppressor homolog 3; Fat3; FAT3_HUMAN; hFat3; Protocadherin Fat 3.
兔心肌成纤维细胞
兔真皮毛细胞
WM-115人黑素瘤细胞
hepg2.2.15人肝癌细胞
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；