实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
兔主动脉平滑肌细胞分离自主动脉组织；主动脉是体循环的动脉主干。其运行路径为：升主动脉起于左心室，至右侧第2胸肋关节高度移行为主动脉弓，弓行向左后至第4胸椎体下缘移行为降主动脉；在第12胸椎体高度穿膈的主动脉裂孔移行为腹主动脉，以上为胸主动脉，至第4腰椎体下缘分为左、右髂总动脉；髂总动脉在骶髂关节高度分为髂内、外动脉。主动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。主动脉平滑肌细胞在心血管发生、发展中具有重要作用，以主动脉平滑肌细胞为实验研究对象，探讨心血管相关发病机制是目前研究的热点；体外培养的主动脉平滑肌细胞对于研究其生理功能、作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
组织来源
产品规格
货号
用途
主动脉组织
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X2023
仅供科研研究实验
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
方法简介：
公司实验室分离的兔主动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的兔主动脉平滑肌细胞经α-SMA荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
ECPELISAKit
大鼠层粘蛋白α1(LAMA1)elisa分析检测试剂盒
LAMA1 ELISA Kit
人甲肟前列腺素D2(PGD2-MOX)elisa分析检测试剂盒
PGD2-MOXELISAKIT
小鼠凝血酶-抗凝血酶复��物（TAT）elisa检测试剂盒
大鼠谷氨酰胺(Gln)elisa检测试剂盒
体液基质金属（MMP-1）活性比色法定量检测试剂盒
人肺炎衣原体抗体IgM(Cpn-IgM)elisa检测试剂盒
鱼转化生长因子β1(TGFB1)elisa分析检测试剂盒
TGFB1 ELISA kit
人雌(E)elisa分析检测试剂盒
EELISAKit
犬烯醇化酶（NSE）elisa检测试剂盒
细胞3－羟－3－甲戊二酰（HMG－COA）还原酶活性直接比色法
小鼠可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)elisa检测试剂盒
大鼠肥胖抑制素elisa检测试剂盒
核受体共激活因子NCOA62抗体
NCOA62
细胞外基质蛋白FRAS1抗体
FRAS1
转录因子9抗体 Anti-TCF9/GCF
孕受体膜相关元件抗体 Anti-PGRMC
纤维细胞源性蛋白 Anti-Otoraplin/OTOR/Fibrocyte derived protein
细胞信号转导分子Smad-2抗体 Anti-Smad2
PE-Cy7标记的兔抗猴IgM
兔主动脉平滑肌细胞Rabbit Anti-Monkey IgM / PE-Cy7
FAM105B蛋白抗体
Alanine aminotransferase; AAT 1; AAT1; Alanine aminotransferase 1; alanine aminotransferase; ALT 1; ALT1; Glutamic alanine transaminase 1; Glutamic pyruvate transaminase; Glutamic pyruvic transaminase 1; Glutamic-alanine transaminase; GPT 1; GPT; GPT1; SGPT; ALAT1_HUMAN.
兔主动脉外膜成纤维细胞
兔心脏微血管内皮细胞
Beta-TC-6小鼠胰岛素瘤胰岛Beta细胞
HMEC-1人微血管内皮细胞株
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；