实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
小鼠肺动脉平滑肌细胞分离自肺动脉组织；肺动脉亦称肺动脉干。在呼吸空气的脊椎动物中，把静脉血由心脏导向肺脏的动脉。肺动脉起于右心室，在主动脉之前向左上后方斜行，在主动脉弓下方分为左、右肺动脉，经肺门入肺。肺动脉干位于心包内，为一粗短的动脉干。起自右心室，在升主动脉前方向左后上方斜行，至主动脉弓下方分为左、右肺动脉。左肺动脉较短，在左主支气管前方横行，分二支进入左肺上、下叶。右肺动脉较长而粗，经升主动脉和上腔静脉后方向右横行，至右肺门处分为三支进入右肺上、中、下叶。肺动脉平滑肌细胞是肺血管的重要结构细胞之一，在调控肺血管的收缩和舒张功能中有重要作用。肺动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。肺动脉平滑肌细胞的异常是肺动脉高压发展的重要病理学特征，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的关键。研究表明，急性和慢性缺氧均可导致肺动脉高压，即缺氧性肺动脉高压，推断缺氧可能是通过促进肺动脉平滑肌细胞的增殖而参与缺氧性肺动脉高压的发展。肺动脉平滑肌细胞主要功能：①细胞表面表达介质（ICAM-1和VCAM-1）参与血管壁炎症反应；②是多数重要动脉的靶细胞。肺动脉平滑肌细胞与主要病生理变化：①平滑肌增生易致肺动脉高压；②先天性肺动脉狭窄；③肺动脉栓塞。
组织来源
产品规格
货号
用途
肺动脉
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X1762
仅供科研研究实验
培养信息：
培养基：基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：成纤维细胞样
传代特性：可传2-3代左右
消化液：0.25%胰蛋白酶
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
小鼠肺动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。
方法简介：
实验室分离的小鼠肺动脉平滑肌细胞采用中性蛋白酶 - 胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测：
实验室分离的小鼠肺动脉平滑肌细胞经α-SMA荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
小鼠白介素12(IL-12/P70)elisa检测试剂盒
人杆状病毒IAP重复包含蛋白2/3(BIRC2/3)elisa检测试剂盒
细胞科萨基病毒B（Coxsackievirus B）定量PCR扩增检测试剂盒
鱼11-酮类固醇elisa检测试剂盒
大鼠神经肽S(NPS)elisa检测试剂盒
木质素含量测试盒
大鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)elisa分析检测试剂盒
组织甘油二脂酰激酶（DAG KINASE）酶连续循环比色法定量检测试剂盒
人干扰素活化基因205(Ifi205)elisa分析检测试剂盒
原钙粘蛋白γA2抗体 PCDHGA2
粘蛋白3抗体
分泌型球蛋白A抗体 Rat secretory IgA
富含脯氨酸蛋白19抗体 PRR19
G蛋白偶联受体γ7抗体 G gamma7
HRP标记的线粒体外膜受体Tom20抗体 TOMM20, HRP conjugated
凝血酶原酶/纤维蛋白原2抗体 FGL2
气味结合蛋白抗体 Aphrodisin
AF750标记的上皮钙粘附分子抗体 E cadherin, Alexa Fluor 750 conjugated
APC标记人CD279 (PD-1)单克隆抗体 human CD279 (PD-1)/APC
聚ADP核糖水解酶PARG抗体 PARG
可溶性苹果酸脱氢酶抗体 MDH1
TOX4蛋白抗体 TOX4
WDR35蛋白抗体 WDR35
微管蛋白重组兔单克隆抗体 beta Tubulin
细胞色素c氧化酶IV重组兔单克隆抗体 COX4I1
大鼠芳香烃受体(AhR)elisa检测试剂盒
小鼠肺动脉平滑肌细胞小鼠上皮性钙黏附蛋白(CDHE)elisa检测试剂盒
人N—乙酰—β—D—氨基葡萄糖苷酶（NAG）elisa检测试剂盒
ADCAD2; C030016K15Rik; Cd; FLJ90062; FLJ90421; Low density lipoprotein receptor related protein 6; LRP6_HUMAN; Low-density lipoprotein receptor-related protein 6; low-density lipoprotein receptor-related protein 6 precursor; LRP-6.
小鼠肺微血管内皮细胞
兔小肠平滑肌细胞
EAC小鼠艾氏腹水癌细胞
HPAF-II 人胰腺癌细胞
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；