实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
小鼠肝窦内皮细胞细胞分离自肝脏组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也**消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中大的消化腺，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面，大部分肝为肋弓所复盖，仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接。肝窦内皮细胞（SEC）是肝脏内所占比例的非实质细胞，位于肝窦腔与肝细胞之间，具有物质转运、吞噬、抗原提呈、耐受等功能。SEC由于拥有一般细胞所没有的窗孔结构、细胞间连结松散、内皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性，从而达到快速交换各种大小分子的目的。肝在遭到多种病原侵袭时，肝窦内皮细胞窗孔逐渐减少或消失，内皮下基膜形成，产生类似于连续型的结构，这一过程称为肝窦化。它由多种因素引起，其过程极复杂，在多种肝病的发病前期阶段均有出现，近年来受到广泛关注。
组织来源
产品规格
货号
用途
肝脏组织
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X1817
仅供科研研究实验
培养信息：
包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 内皮细胞样
传代特性 可传1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
方法简介：
公司实验室分离的小鼠肝窦内皮细胞采用混合酶灌流消化、反复低速离心、密度梯度离心法，并通过内皮细胞培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的小鼠肝窦内皮细胞经CD31、CD14荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
小鼠补体蛋白5(C5)elisa分析检测试剂盒
人假定蛋白LOC677168 elisa分析检测试剂盒
正常女性人体肝组织微粒体组分（5毫克/毫升）
病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒 50次
大鼠维生素C(VC)elisa检测试剂盒
小鼠载脂蛋白A1(Apo A1)elisa检测试剂盒
大鼠核因子κB抑制因子β(IκBβ)elisa检测试剂盒
细胞ERK1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
人胱天蛋白酶8(Casp-8)elisa分析检测试剂盒
长链烯脂酰辅酶A水化酶抗体 ECHS1
脂肪甘油三酯脂酶抗体 Adipose Triglyceride Lipase
钙/钙调素依赖蛋白激酶1β/CaMKIβ抗体 PNCK
甘油二酯酰基转移酶2抗体 DGAT2
IKK激酶相互作用蛋白抗体 IKIP
Ki67蛋白抗体 Ki-67
前列腺相关蛋白MSMP抗体 MSMP
去泛素化酶15抗体 USP15
APC标记人HLA-DR单克隆抗体 human HLA-DR/APC
B Raf单克隆抗体 BRAF
跨膜蛋白106B抗体 TMEM106B
蛋白激酶A4受体抗体 EphA4 R
X连锁生长调控因子GCFX抗体 SHOX
β半乳糖苷酶抗体 Beta galactosidase
细胞凋亡抑制因子3α抗体 Survivin 3 alpha
细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1抗体 CKS1
大鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPRⅡ)elisa检测试剂盒
小鼠肝窦内皮细胞小鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)elisa分析检测试剂盒
人β2转铁蛋白(β2TF)elisa检测试剂盒
Apoptotic protein NDPP 1; Apoptotic protein NDPP1; CARD 8; CARD inhibitor of NF kappa B activating ligand; CARD inhibitor of NF kappaB activating ligand; CARD inhibitor of NF kappaB activating ligands; CARD-inhibitor of NF-kappa-B-activating ligand; CARD8; CARD8_HUMAN; CARDINAL; Caspase recruitment domain containing protein 8; Caspase recruitment domain family member 8; Caspase recruitment domain protein 8; Caspase recruitment domain-containing protein 8; DACAR; NDPP 1; NDPP1; TUCAN; Tumor up regulated CARD containing antagonist of CASP9; Tumor up regulated CARD containing antagonist of caspase 9; Tumor up-regulated CARD-containing antagonist of CASP9; Tumor upregulated CARD containing antagonist of CASP9.
小鼠肝内胆管上皮细胞
兔胃平滑肌细胞
GFP标记小鼠成肌细胞;C2C12-GFP
Hs 578T人乳腺癌细胞
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；