实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
小鼠脊髓神经元细胞分离自脊髓组织；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的神经系统延伸部分。神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物神经系统的一部分，在椎管里面，上端连接延髓，两旁发出成对的神经，分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形(蝴蝶型)灰质区，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的。脊髓两旁发出许多成对的神经(称为脊神经)分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。神经系统基本的结构和功能单位是神经元，即神经细胞，其大小和外观在神经系统中差异很大。但都具有胞体和树突、轴突。胞体又叫核周体，内含神经丝、微管、内质网、游离核糖体和一个有明显核仁的核。一些大神经元突起的粗面内质网可用Nissl染色显示，在光镜下是灰蓝色斑块状，称为尼氏小体。树突和轴突是神经元的突起，能在神经元之间传递电冲动，突起的大小和形态各不相同，很难用常规的显微镜鉴别。脊髓组织内含有大量胶质细胞，神经元含量少，分离纯化难度大，且脊髓神经元细胞是高度分化的终末细胞，不能分裂增殖，培养要求高。刚接种的脊髓神经元呈圆形，体积小，透亮，无突起。培养2-3d，可见胞体增大，突起增多延长；培养6-7d，细胞体大饱满，突起明显增加延长并交织成网，光晕明显，立体感强。培养20d后，死亡细胞明显增加，细胞出现内空泡，突起粗细不均，甚至脱壁，发生细胞崩解。
组织来源
产品规格
货号
用途
脊髓组织
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X1949
仅供科研研究实验
培养信息：
包被条件 PLL（0.1mg/ml）
培养基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 神经元细胞样
传代特性 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
方法简介：
公司实验室分离的小鼠脊髓神经元细胞采用胶原酶&胰酶联合消化法、神经元培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的小鼠脊髓神经元细胞经β-Tubulin荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
二氨基苯甲酸（DABA）DNA比色定量测定试剂盒
MAP7D3蛋白抗体
MAP7D3
桥粒糖蛋白4抗体
Desmocollin 4
小鼠胃蛋白酶(Pepsin)elisa检测试剂盒
大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b TRACP 5b elisa检测试剂盒
组蛋白脱乙酰化酶（HDAC）总活性比色法定量检测试剂盒
人胰腺衍生因子（PANDER）elisa检测试剂盒
原钙粘蛋白β5抗体
PCDHB5
艾滋病病毒-1包膜糖蛋白抗体
HIV gp160
磷酸化非受体蛋白激酶2抗体 Anti-Phospho-Tyk2(Tyr1054/1055)
肿瘤抑制基因P53蛋白抗体（野生型P53） Anti-P53 protein(wt-p53)
磷酸脂磷酸水解酶1抗体 Anti-PPAP2A
突触泡蛋白2B抗体 Anti-SV2B
FITC标记的兔抗小鼠IgG H&L-Fc
Rabbit Anti-Mouse IgG Fc / FITC
磷酸化自噬相关蛋白3抗体
phospho-ATG3 (Tyr18)
锌指蛋白297抗体 Anti-ZBTB22/ZNF297
核因子活化T细胞胞浆蛋白2抗体 Anti-NFAT1/NFATc2
环指蛋白128抗体 Anti-RNF128
突触结合蛋白1抗体 Anti-Synaptotagmin 1/SYT1
大鼠B细胞κ轻肽基因增强子抑制因子,激酶β (IKBKB)elisa分析检测试剂盒
小鼠脊髓神经元细胞IKBKB ELISA kit
人肝细胞生长因子(HGF)elisa分析检测试剂盒
PRAS40; AKT1 substrate 1; AKT1-S1; AKT1S-1; AKT1S 1; AKT1 S1; Lobe; PRAS 40; PRAS-40; Proline rich akt substrate; 40 kDa proline rich AKT substrate; 40 kDa proline-rich AKT substrate; AKT1 substrate 1; AKTS1_HUMAN; MGC2865; Proline rich Akt substrate 40 kDa; Proline-rich AKT1 substrate 1.
小鼠脊髓微血管内皮细胞
兔肾小球内皮细胞
MLE-12小鼠肺上皮细胞
Huh7.5人肝癌细胞
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；