实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
小鼠肾小球系膜细胞分离自肾小球组织；肾小球是肾元中的用于将血液过滤**原尿的一团毛细血丛，被鲍氏囊所包裹，是尿液形成的重要构造。血液经由入球小动脉进入肾小球。肾小球内的微血管不像其他微血管，汇流入静脉，而是流入出球小动脉。在肾小球内，微血管受到高压，而加速了超滤作用（hyperfiltration）的进行。微血管中的血液经由超滤作用之后，形成滤液，渗入鲍氏囊内。肾小球与鲍氏囊合称为肾小体，肾小球的过滤速率便称为肾小球过滤率。肾小球系膜是位于肾小球袢之间的一种特殊间充质，由系膜细胞和系膜基质组成。肾小球系膜细胞是肾小球内非常活跃的细胞，具有分泌细胞基质、产生细胞因子、吞噬和大分子物质及类似平滑肌细胞收缩的功能。肾小球系膜细胞增生和基质的过多产生是多种肾小球肾炎的主要病理表现。肾小球系膜细胞的培养是研究系膜扩张、瘢痕形成和肾小球硬化的理想方法。系膜细胞的主要作用可能有：①收缩作用，入球小动脉和出球动脉的收缩作用受系膜细胞的调节，以影响袢的内压和滤过率；②支持作用，它填充于袢之间，支持的位置；③吞噬作用，能吞噬被阻留在基膜内的大分子物质和蛋白质；④分泌肾素，在肾缺血或复合物沉积时，系膜细胞增生且分泌肾素。
组织来源
产品规格
货号
用途
肾组织
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X1834
仅供科研研究实验
培养信息：
包被条件 PLL（0.1mg/ml）
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 梭形、多角形
传代特性 可传1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
方法简介：
公司实验室分离的小鼠肾小球系膜细胞采用机械研磨法结合不同孔径不锈钢网筛过滤后使用胶原酶消化制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的小鼠肾小球系膜细胞经α-SMA荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
大鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)elisa检测试剂盒
大鼠CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)elisa检测试剂盒
小鼠可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(sLOX-1)elisa检测试剂盒
犬表面活性蛋白D(SP-D)elisa分析检测试剂盒
细胞醛缩酶（ADOLASE）活性比色法定量检测试剂盒
鱼CD8分子(CD8)elisa分析检测试剂盒
大鼠神经突蛋白1(NRN1)elisa检测试剂盒
体液人体腺病毒（adenovirus）定性检测试剂盒
豚鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)elisa检测试剂盒
羟类固醇脱氢酶17β2抗体 HSD17B2
去整合素样金属蛋白酶9抗体 ADAM9
G蛋白偶联受体RTA蛋白抗体 GPCR RTA/MRGPRF
HRAS样抑制因子3抗体 Hrasls3
原钙粘蛋白β3抗体 PCDHB3
粘蛋白15抗体 MUC15
分泌球蛋白样蛋白抗体 SCGBL
富含亮氨酸重复序列蛋白1抗体 Lano/LRRC1
细胞分裂相关蛋白CSTF64抗体 CstF-64
细胞内流钾通道蛋白Kir4.1抗体 Kir4.1
TOMM20L蛋白抗体 TOMM20L
V组和跨膜结构域蛋白5抗体 VSTM5
AF750标记的脑源神经营养因子抗体 BDNF, Alexa Fluor 750 conjugated
APC标记人CD206(MRC1)单克隆抗体 human CD206 (MRC1)/APC
巨噬细胞炎症蛋白2（ GRO β）抗体 CXCL2
酪蛋白激酶δ1抗体 CSNK1D
线粒体复合物II蛋白表达ELISA定量检测试剂盒
小鼠肾小球系膜细胞红霉素-N-脱甲基酶（ERND）测试盒
10% SDS分子生物级溶液
GABA transport protein; GAT 2; GAT-2; GAT2; Solute carrier family 6 (Neurotransmitter transporter, GABA), member 13; S6A13_HUMAN.
小鼠食管成纤维细胞
兔膀胱平滑肌细胞
BRL大鼠肝细胞
K7M2WT (K7M2-wt)小鼠骨肉瘤成骨细胞
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；