小鼠视网膜微血管周细胞

培养方法与步骤：

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①动物处理：用颈椎脱白法处死使新生乳鼠断髓迅速死亡，然后将整个乳鼠浸入盛有75%酒精的烧杯中2~3秒（浸泡时间不能过长、以免酒精从口浸入体内，影响培养）后迅速置于的培养皿中，带入超净工作台内进行无菌操作取材。
②取材：将乳鼠俯卧位，用乙醇进行一次背部，再用的解剖剪剪开背部肋下缘脊柱两侧的皮肤，剖开腹部，取出肝脏放入另一培养皿中，除去其他连带组织，用消过毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝组织3次，每次1~2 ml，洗去血污，将废液弃于废液杯中。
③组织分离：用眼科剪和镊子将肝门区所附的血管结缔组织尽可能去除，然后将肝组织反复剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小块后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反复吹打清洗组织块儿3次，弃废液。
④接种：用吸管加2滴小牛血清，小心地用弯头吸管前端将组织块轻轻吹打均匀制成悬液，然后仍用吸管前端吸取组织悬液、将其均匀地（组织块之间相距约0.5 cm左右）排种在培养瓶底壁上; 每个25ml的培养瓶中可接种20块左右。

⑤培养：将培养瓶慢慢翻转，使瓶底向上，加入1~2 ml培养液，拧紧瓶盖，做好标记，置 37 ℃恒温箱中培养1~2小时，待组织块略干燥能牢固贴于瓶壁上后，再缓慢翻转培养瓶（尽量注意不要使组织块漂浮起来），另加入培养液2 ml左右使其能覆盖组织块，将瓶盖调整在略微松弛状态，继续置37 ℃恒温箱静放培养。

⑥观察：细胞接种后一般几个小时内即可贴壁，并开始生长。如果无污染且细胞生长良好，可见培养液颜色由原来的橘红色变成黄色，此时可补加或更换培养液。10~15天后可长成致密单层细胞，这时可进行传代培养。

小鼠视网膜微血管周细胞

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产品名称	小鼠视网膜微血管周细胞	产品规格	5×105cells/T25细胞培养瓶
组织来源	视网膜组织	生长特性	贴壁
细胞形态	成纤维细胞样	分类	小鼠原代细胞
货号	A01X1992	用途	仅供科研实验

培养信息：

细胞简介：

小鼠视网膜微血管周细胞分离自视网膜组织；视网膜居于眼球壁的内层，是一��透明的薄膜。视网膜由色素上皮层和视网膜感觉层组成，两层间在病理情况下可分开，称为视网膜脱离。色素上皮层与脉络膜紧密相连，由色素上皮细胞组成，它们具有支持和营养光感受器细胞、遮光、散热以及再生和修复等作用。组织学上视网膜分为10层，由外向内分别为：色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜、外颗粒层、外丛状层、内颗粒层、内丛状层、神经节细胞层、神经纤维层、内界膜。视网膜内层为衬于血管膜内面的一层薄膜，有感光作用；后部鼻侧有一视神经。视网膜上的感觉层是由三个神经元组成。神经元是视细胞层，专司感光，它包括锥细胞和杆细胞。视杆细胞主要在离中心凹较远的视网膜上，而视锥细胞则在中心凹处多。层叫双节细胞，约有10到数百个视细胞通过双节细胞与一个神经节细胞相联系，负责联络作用。第三层叫节细胞层，专管传导。视网膜是一层菲薄的但又非常复杂的结构，它贴于眼球的后壁部，传递来自视网膜感受器冲动的神经纤维跨越视网膜表面，经由视神经到达出口。视网膜的分辨力是不均匀的，在黄斑区，其分辨能力强。它是组成血管腔面单层扁平上皮样细胞，它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在视网膜血管的发病机制中有重要病理生理学意义。周细胞（pericyte）又称Rouget细胞和壁细胞，是一种包围全身和静脉中内皮细胞的细胞，可以收缩。周细胞嵌入内皮细胞的基膜中，通过物理接触和旁分泌信号与内皮细胞进行细胞通讯，监视和稳定内皮细胞的成熟过程。此外，周细胞还具有调控血流量、细胞碎屑和吞噬以及血脑屏障渗透性的作用，其多功能性是目前研究的热点之一，所以对血管周细胞的生物学特征、标记物、细胞功能等的研究都为相关研究提供基础资料。周细胞产生手指状的外延以调控的血流量。周细胞和内皮细胞之间共同拥有一个基膜，基膜上有多种细胞连接，包括多种整合素、神经钙黏素、纤连蛋白以及接合素。它还参与直径的双向调控；受损时，周细胞还可增殖，分化为内皮细胞和成纤维细胞。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠视网膜微血管周细胞采用中性蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的小鼠视网膜微血管周细胞经α-SMA荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。

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原代细胞步骤：

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