实验方法:
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
细胞简介：
小鼠输尿管上皮细胞分离自输尿管组织；输尿管上接肾盂，下连膀胱，是一对细长的管道，呈扁圆柱状，位于腹膜后，为一肌肉粘膜所组成管状结构，沿腰大肌内侧的前方垂直下降进入骨盆。输尿管有三个狭窄部：一个在肾盂与输尿管移行处（输尿管起始处）；一个在越过小骨盆入口处；后一个在进入膀胱壁的内部。这些狭窄是结石、及坏死组织容易停留的部位。输尿管——膀胱连接处有一种特殊结构，即瓦耳代尔鞘，它能有效地防止膀胱内尿液返流到输尿管。临床上将输尿管分为上、中、下三段，也可称为腹段、盆段、膀胱段。其中，腹段自肾盂输尿管交界处，到跨越髂动脉处；盆段，自髂动脉到膀胱壁；膀胱段，自膀胱壁内斜行至膀胱粘膜、输尿管开口。输尿管管壁分为4层，黏膜层、固有层、肌层、外膜。黏膜层表面为移行上皮，约有4-5层细胞；固有层由细密的结缔组织构成，内含胶原纤维和少量弹性纤维；输尿管肌层主要由内纵和外环两层平滑肌组成；外膜为疏松结缔组织，营养血管由外膜进入输尿管。其中，输尿管上皮细胞主要分布于黏膜层。
组织来源
产品规格
货号
用途
尿道组织
5×105cells/T25细胞培养瓶
A01X1837
仅供科研研究实验
培养信息：
包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 上皮细胞样
传代特性 可传1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
方法简介：
公司实验室分离的小鼠输尿管上皮细胞采用先中性蛋白酶消化、然后机械分离法使输尿管分层、后胶原酶消化，并通过上皮细胞培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的小鼠输尿管上皮细胞经PCK荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品：
牛血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)elisa分析检测试剂盒
大鼠血管**素样蛋白6(ANGPTL6)elisa检测试剂盒
细胞氧化应激活性氧（ROS）光泽精化学发光法定量检测试剂盒
豚鼠黄体(LH)elisa分析检测试剂盒
DNA探针聚合酶整合标记试剂盒
鱼皮质醇(Cortisol)elisa分析检测试剂盒
大鼠丝氨酸蛋白酶抑制剂alpha-1 elisa检测试剂盒
酵母菌SD-HIS培养基
活细胞/死细胞双染试剂盒1000T
羟类固醇脱氢酶17β-HSD重组兔单克隆抗体 HSD17B1
醛固酮还原酶家族1成员D1抗体 AKR1D1
G蛋白偶联受体TGR7蛋白抗体 GPCR TGR7
HRP标记的β淀粉样肽（1-42）单克隆抗体 beta-Amyloid(1-42), HRP conjugated
原钙粘蛋白β7抗体 PCDHB7
粘蛋白-1单克隆抗体 MUC1
分泌细胞凋亡相关蛋白1抗体 SARP1
富含脯氨酸/丝氨酸卷曲螺旋蛋白1抗体 PSRC1
细胞分裂周期37样蛋白1抗体 CDC37L1
细胞迁移诱导蛋白19抗体 NBR1
TOMM40L蛋白抗体 TOMM40L
WASP结合蛋白抗体 WIPF2
AF750标记的前列腺素E受体蛋白4抗体 EP4, Alexa Fluor 750 conjugated
APC标记人CD25单克隆抗体 human CD25/APC
巨噬细胞炎症因子1β /MIP-1β抗体 CCL4
跨膜蛋白29抗体 FAM156A
纯化大鼠肾上腺髓质素（AM）基因重组表达载体（pcDNA-AM）测序引物对
小鼠输尿管上皮细胞人核基质蛋白22(NMP-22)elisa分析检测试剂盒
大鼠黄体(LH)elisa检测试剂盒
NCLN; NCLN_HUMAN; NET59; Nicalin; Nicalin homolog (zebrafish); Nicastrin like protein; Nicastrin-like protein.
小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞
兔脑膜细胞
IEC-6大鼠小肠隐窝上皮细胞
KG-1人急性髓性白血病细胞
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净； （3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中； （4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min； （5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的 盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；