脑立体定位仪-竹节参总皂苷对不同时间段脑出血模型大鼠脑损伤的保护作用

竹节参总皂苷对不同时间段脑出血模型大鼠脑损伤的保护作用

闵静1，严菊华1，敖明章2( 1. 湖北职业技术学院医学院，湖北孝感432000; 2. 华中科技大学生命科学与技术学院)

摘要: 目的研究竹节参总皂苷( TSPJ) 对脑出血大鼠脑损伤不同时间段的影响。方法采用胶原酶法制备脑出血动物模型，将48 只大鼠随机分为假手术组、模型组、TSPJ 低、高剂量组共4 组，每组12 只; 造模后6h 灌胃给药，每12h 1 次，于造模后12、72h 测各组大鼠脑组织含水量，超氧化物歧化酶、丙二醛含量，IL-6、TNF-α 水平。结果与模型组比较，72h 高剂量TSPJ 组脑组织含水量减少，超氧化物歧化酶活性增高，丙二醛含量下降，IL-6、TNF-α 水平下降，12h 时TSPJ 高剂量组超氧化物歧化酶活性增高，TNF-α 下降; 丙二醛、IL-6 含量变化不明显。结论TSPJ 能减轻出血性脑损伤，对受损脑组织发挥保护作用，且有时间依赖性。

关键词: 竹节参总皂苷; 脑出血; 脑水含量

中图分类号: Ｒ965. 1 文献标识码: A 文章编号: 2095-4646( 2014) 03-0194-03

脑出血( intracerebral hemorrhage， ICH) 是一种急症重症，严重威胁人们的健康; 脑出血后血凝块回缩，血脑脊液屏障的破坏，血肿周围缺血，组织炎症反应等因素都可造成脑组织的水肿，从而引起功能障碍［1］。竹节参总皂苷( total saponins ofpanax japonicus，TSPJ) 具有**化瘀作用，本实验通过观察12h 和72h 两个时间段TSPJ 对脑出血大鼠脑组织超氧化物歧化酶( SOD) 活性、丙二醛( MDA) 及IL-6、TNF-α 含量的影响，研究其不同时间段的效果及机理。

1 材料与方法

1． 1 实验动物

健康雄性SD 大鼠，体质量为240 ～ 280g，清洁级，由湖北省动物实验中心提供，合格证号:SCXK( 鄂) 2011 ～ 012; 分组: 大鼠随机分为4 组，假手术组、模型组、TSPJ 低剂量组( 100mg /kg) 、TSPJ 高剂量组( 200mg /kg) ，每组12 只，分别观察术后12、72h 两个时间点各项指标。TSPJ 组术后6h 灌胃给药，假手术组及模型对照组灌胃等量生理盐水，以后12h /次TSPJ 组灌胃给药，而假手术组及模型对照组灌胃等量生理盐水，各组饲养条件相同。

1． 2 药品与仪器

竹节三七样品采自湖北恩施，采用醇提取法，**称取样品50mg，定容于50ml 容量瓶，**吸取样品液2ml，置50ml 容量瓶中定容，摇匀。由华中科技大学生命科学院天然产物实验室通过标准品检测，TSPJ 净含量为33． 3%，用前配成悬浊液，置4℃ 冰箱保存备用。Ⅶ型胶原酶，美国Sigma公司产品; 注射用尿激酶( 批号03290，南京南大药业有限责任公司) ，配制成200 IU / L 的溶液;SOD 试剂盒、MDA 试剂盒( 上海恒远生化试剂有限公司) ; IL-6、TNF-α 试剂盒，北京福瑞生物工程有限公司。仪器: 大鼠脑立体定位仪，微量注射仪购于北京智鼠多宝生物科技有限责任公司; 电子天平( SAＲTOＲ2US，BP211D) ，德国生产; GF-D200半自动生化分析仪( 山东高密彩虹分析仪器有限公司) ， 8021 离心机( 上海手术器械厂) ; 752 分光

光度仪( 上海精密仪器仪表有限公司) 。

1． 3 模型制备

参照Ｒosenberg 等［2］的方法，根据包新民大鼠脑立体定位图谱［3］确定尾状核的位置: 术前禁食，自由饮水，大鼠经****( 0． 1ml /100g) 腹腔麻醉俯卧位固定于立体定位仪上，据图谱调整立体定位仪于注射点，头皮正中常规**后矢状位切开约1． 5cm，暴露前囟点，用骨钻钻颅打孔( 直径约1mm) ，用微量进样器吸取胶原酶2ml，迅速插入已钻好孔内，进针5mm，注射时间不少于15min，留针10min 后缓慢退针，钻孔用骨蜡封闭，局部**后，缝合皮肤，假手术组注射2ml 的生理盐水，手术过程同出血组。

1． 4 检测方法

1． 4． 1 脑组织含水量测定

分别于术后第12h 及第72h，过量麻醉大鼠，快速断头取脑组织，用滤纸吸干脑表面液体和血迹，小塑料封口袋密闭全脑，电子天平称湿重，然后放入80℃烤箱中，72h 后称干重。脑含水量计算公式: ［( 湿重－ 干重) /湿重］× 100%。

1． 4． 2 SOD 活性、MDA 含量测定

各组动物再分两组分别于术后第12h 及第72h，过量麻醉大鼠，快速断头取脑组织，微冻硬后取出，置薄膜隔开的干冰上，分离出血侧皮质及基底节，4℃下用预冷的匀浆介质制备成10%的脑匀浆置3000r /min 离心15min 后，取上清液按试剂盒方法操作。SOD 活性测定: 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基，进而氧化羟胺形成亚硝酸盐，在550nm 处测其吸光度，通过公式计算。MDA 含量的测定: 通过过氧化脂质降解产物中的MDA 可与硫代***酸缩合，形成红色产物，在532nm 测吸光度。

1． 4． 3 IL-6、TNF-α 测定

分别于术后第12h 及第72h 手术，取脑匀浆上清液，按放免试剂盒说明书，加入分离剂后充分混匀，放室温20min，离心，吸上清，生化分析仪上测放射性，以B /T 计算NSB、SO 结合百分率，以B /B0 计算标准及待测样品结合百分率，并查出样品值。

1． 5 统计方法

以SPSS 17． 0 统计分析，数据以珋x ± s 表示，各组间比较采用t 检验，P ＜ 0. 05 为差异有统计学意义。

2 结果

2． 1 TSPJ 对脑水肿的影响

从表1 可见， 12h 时TSPJ 组脑出血后的脑组织含水量无明显影响， 72h 时高剂量组TSPJ 组脑出血后的脑组织含水量减少，和模型组比较有显著性差异( P ＜ 0． 05) 。