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怎样管理与维护高效液相色谱柱?


高效液相色谱柱的管理

栏目管理
制定并严格执行色谱柱管理标准操作规程。每一个新购买的色谱柱都必须进行注册登记,内容包括生产企业、产品名称、型号、规格、购买时间、开机时间、单价、色谱柱保护液等。色谱柱分类存放,柱盒,盒子上贴有标签,注明类别,如硅胶柱、化学键合硅胶柱、氰基或氨基柱、离子交换树脂柱、凝胶柱。色谱柱说明装在一个紧凑的袋子中,并附在注册簿上。 每次激活色谱柱时,都会在色谱柱上贴一个标签以指示激活日期。
色谱柱多可以使用色谱柱收纳箱,方便收纳。

色谱柱收纳箱

每列每两个月维护一次,特别是对于使用频率较低的列。 由于存放时间长,很容易使柱子变干。 每次做保养记录。

对于确实出现故障的色谱柱,做好退役记录,不要随意丢弃,专门存放。 如果需要填充当前使用的色谱柱的填料,可以使用色谱柱的储存填料。 在从事生产的单位质检部门,对于使用时间长的柱子,可以用来检测产品的中间体,降低了效率。

色谱柱维护
色谱柱使用一段时间后,经常会遇到色谱柱被污染的情况,色谱柱的效率会在一定程度上降低。采用适当的方法保护色谱柱,可以延长色谱柱的使用寿命。

样品和流动相处理
溶解的样品在进样前用滤膜过滤以去除不溶物。 如有必要,需要对样品进行预处理。 流动相中的杂质会影响效率,所以尽量使用色谱纯溶剂,至少是分析纯,使用前用微孔膜过滤流动相。
在流动相的输液管前安装过滤器。 过滤器定期用甲醇超声波清洗,如果效果不好,可用10%的稀硝酸浸泡清洗。 对于严重堵塞的过滤器,可以在火焰上燃烧后进行清洁。

保护柱(预柱)的使用
对于更贵的色谱柱,可以在柱前加一根保护柱,防止样品中的杂质污染分析柱。 对于制备柱,保护柱的使用尤为重要,因为它的进样量很大。

常规冲洗
硅胶、氧化铝、极性键合色谱柱每次使用后,用二氯甲烷或正己烷等溶剂低流速长时间冲洗; 对于键合硅胶色谱柱、离子交换色谱柱和凝胶色谱柱,先用蒸馏水冲洗,再用甲醇冲洗,再用甲醇和蒸馏水按一定比例混合的溶液冲洗过夜。

对于使用一段时间后柱效下降的色谱柱,可采用以下方法进行再生。

硅胶、氧化铝和极性键合相色谱柱按以下顺序洗涤:碱戊烷或己烷←→三氯乙烷←→乙酸乙酯←→丙酮←→乙醇←→水。 对于键合相硅胶,先用蒸馏水再用甲醇洗柱子。 洗涤过程中可加入少量二甲基甲酰胺。

离子交换树脂柱
大多数树脂可以通过高浓度(1-2molL)的NaCl溶液再生。 少数与树脂结合紧密的物质如油脂,可用低浓度碱性溶液(如0.1molL NaOH溶液)洗涤,酸性有机物吸附在固定相上。 用低pH缓冲液冲洗,碱性有机物用高pH缓冲液冲洗,然后用蒸馏水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸馏水。

凝胶色谱柱
根据分离物质的分子量,凝胶柱分离物质。 一般来说,用非离子洗涤剂(0.2%-1% NP-40或Lubrol)或稀释的氢氧化钠清洗以去除大部分结合物质。通常用稀氢氧化钠或非离子洗涤剂(0.2%-1% NP-40 或 Lubrol)洗涤以去除大部分结合物质。

若仍有部分污染物无法去除,可用24%或30%乙腈冲洗过夜以去除疏水蛋白,30%-50%醋酸可去除亲水性蛋白质,用蛋白水解酶处理可分解凝胶中残留的微量胃蛋白酶,并然后用蒸馏水←→甲醇←→蒸馏水冲洗。

污染柱的处理
由于强保留物质的污染,流动相或样品中的不溶物沉积在柱头上。 可采用以下方法洗涤: 除脂可用C4H8O、乙腈或甲醇洗涤; 去除蛋白质可用乙腈、丙醇和1%三***洗脱; 一些高度疏水的化合物可以用乙腈或甲醇洗脱,同时重复注入 100-200ml C4H8O。

柱头处理
对于柱头严重堵塞污染、溶剂失效的色谱柱,只能打开柱子拆下柱顶填料重新安装:先拆下不锈钢烧结过滤器,检查柱床,常见凹痕或被污染的有色填料,去除不规则床层和有色填料,使柱床呈白色且完全水平,然后用甲醇作为糊状填料匀浆,将糊状填料匀浆滴在柱上,靠重力从匀浆中排出甲醇溶液. 重复上述步骤,直到达到填充水平。

柱存储
首先,色谱柱在存放之前必须进行清洁。如果储存在水性溶剂或水中,色谱柱可能会导致微生物的生长。

极性色谱柱可用适当的溶剂如二氯甲烷冲洗;

用甲醇冲洗键合相色谱柱; 阴离子交换层析柱用0.002%氯己定(氯己定)缓冲液冲洗,阳离子交换层析柱用0.005%硫柳汞缓冲液冲洗; 凝胶色谱柱用缓冲液中的 0.02% 氮化钠或 20% 乙醇冲洗。 然后密封柱子两端,防止溶剂蒸发干燥柱子而引起柱子结构的几何变化。

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