34.培养基中丙酮酸钠的作用是什么? 丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是,如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。 35.二价离子抑制胰蛋白酶活性吗?使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么? 二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前,用EDTA清洗细胞,以消除来自培养基中所有的二价离子。 36.室温下配制的Tris-HCl溶液,在37℃使用时PH值是多少? 缓冲液PH值随温度变化而变化。下表列出了50 mM Tris-HC 溶液在4℃,25℃,37℃时,不同PH值。 50 mM Tris-HC 溶液在4℃,25℃,37℃时,不同PH值
37.如何从T25瓶中转移sf9细胞?能用胰蛋白酶消化吗? 我们推荐使用脱落细胞的方法,此技术破坏性*小,生活力*高。通过使用巴斯德吸液管,让细胞上培养基流动。作为一种选择你也可以轻轻拍打培养瓶。只有在**必要的情况下,才使用胰酶消化细胞。 38.胰酶消化一个T25瓶的sf9细胞: (1)去除培养基。 (2)用2 ml 1xPBS(足以覆盖细胞表面)洗涤细胞,去除PBS。 (3)加入2 ml 1x胰酶EDTA(恰好覆盖细胞表面)。 (4)37 ℃孵育5到10分钟。在仪器下检测看到5分钟后它们正在向上移动。 (5)向细胞中加入2 ml 细胞培养液,移入锥形管,用2 ml培养液洗瓶壁,移入同一锥形管中。(培养基中的FBS终止了胰酶的活性。) (6)离心(1 100 rpm)沉淀细胞。去除培养基。 (7) 用新的培养基重新悬浮细胞。传代。 39.在Sf9, Sf21, 和high Five细胞悬浮培养时,肝素的使用量是多少? 为了防止悬浮培养细胞聚集的形成,使用肝素浓度为10单位/毫升细胞悬液。 40.在重新冻存sf9细胞前,它可以传多少代?随着传代的次数的增加,它的感染能力会降低吗? 通常情况当细胞经过30次传代后,应该返回冻存。无论什么时候计数时,都应该检查细胞活力。如果超过95%的细胞保持有活力和在大约30小时左右加倍,细胞仍然可以使用。如果活力和加倍时间下降,它们的感染力将不在是有效的。 41.贮存在冰箱中的瓶口已开的培养基,在放置几天后颜色变紫? 这主要是由于在暴露到周围的CO2水平时,碳酸氢纳导致了pH值的上升。您可以在使用前松开瓶口,在CO2培养箱孵育培养基10-15分钟,来校正溶液的pH值(确定松开瓶口以保证气体交换)。 42.细胞培养基偶然被冻,可否继续使用? 如果细胞培养基偶然被冻,您应该熔化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生,培养基可以正常使用,如果出现沉淀,只能丢弃这些培养基。 43.无血清培养与有血清培养使用的***量一样吗? 当在无血清培养基中添加***时,降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些***。在无血清培养条件下,***不被灭活,可能对于细胞达到毒性水平。
细胞培养技术是整个分子生物学实验的**步,关系到接下来整个实验的成功与否。以上,总结一下在细胞培养过程中可能遇到的疑惑和问题,希望能够为广大客户带来一点点的指引。本公司由海外华侨和多名海归博士组成的技术团队,主要致力于**学、分子生物学、病理学、代谢组学、生物化学技术在科研中的应用与推广,专业从事医学科研课题外包,项目申请、组织实施、检查评估、验收鉴定等服务。有着十分丰富的科研经验和实战技术,所以值得选择,以上信息仅供参考,详情请致电相关工作人员为您解答。
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