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细胞克隆形成实验服务|实验技术服务
日期:2024-12-25 01:28
浏览次数:243
摘要:关键词:细胞克隆形成实验服务|实验技术服务
简介:世界****细胞克隆形成实验服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
细胞克隆形成实验服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:细胞克隆形成实验服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序...
关键词:细胞克隆形成实验服务|实验技术服务
简介:世界****细胞克隆形成实验服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
细胞克隆形成实验服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:细胞克隆形成实验服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
概念:
细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。
1.试剂与材料
(1)供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。
(2)1640培养液100ml。
(3)完全1640液100ml。
(4)2.5%FCS-1640液50ml。
(5)HAT培养液100ml。
(6)50%PEG:取分子量4000,高纯度的(日本进口或Serva)PEG10g放入25ml瓶中高压灭菌,使用前用预热于40℃的1640液10ml等量(W/V)混合,以酚红检查pH,一般不必调pH。如pH有改变,可用HCl或NaHCO3调整。
(7)10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。
(8)40孔塑料培养盘。
2.操作方法
⑴准备好脾细胞。
⑵在50ml沉淀管中混合108脾细胞和107小鼠骨髓瘤细胞,并加入50ml2.5%FCS-1640液。
⑶室温400g离心3min,使细胞沉淀。
⑷移去上清液。
⑸轻敲管底部,使沉淀流动,把沉淀管放于40℃水浴中,使其达融合温度。
⑹加预热至40℃的50%PEG0.8ml,用1ml吸管缓慢滴加,边加边摇沉淀管,肉眼观察可见有颗粒出现,滴加过程要求持续2min。
⑺加1ml1640液,边加边摇动,持续1min。
⑻重复⑺一次。
⑼加1ml1640液,边加边摇动,持续0.5min。
⑽重复⑼一次。
⑾加1640液15ml。
⑿室温,400g离心1min,使细胞沉淀。
⒀去上清,轻敲管底部,加25ml含有HAT的完全1640液。
⒁往已于前一日种有饲养细胞的40孔塑料培养盘中滴加融合的细胞液,每孔1滴(约0.05ml)。
⒂轻摇后,放入5%CO2饱和湿度的37℃温箱中培育。
⒃第3、6、9、10日换入含HAT的完全1640培养液。注意轻轻吸取上清液,勿将固定于孔底的细胞吸出,根据需要加入适量的饲养细胞。
⒄于第12、15日加入含有HAT的完全1640培养液。在每次换液前用倒置显微镜观察,大约在10天左右就可观察到杂交瘤细胞生长出来。大多数杂交瘤细胞在10~20天内出现,但也有在1个月左右才能出现的。杂交瘤细胞出现后,吸取上清液,检查抗体。
⒅对继续生长的杂交瘤细胞进行增殖传代。在传代过程中,依情况取消HAT液和完全1640液而代之以10%FCS-1640液。同时保存于液氮和进行克隆化,在这期间每代都要检查抗体,以防止产生抗体细胞的变异和丢失。
主要特性:
①蛋白质的精细结构;
②淋巴细胞亚群的表面新抗原;
③组织相容性抗原;
④激素和药物的放射免疫(或酶免疫)分析;
⑤肿瘤的定位和分类;
⑥纯化微生物和寄生虫抗原;
⑦免疫治疗和与药物结合的免疫-化学疗法 。
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测序实验流程:
概念:
细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。
1.试剂与材料
(1)供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。
(2)1640培养液100ml。
(3)完全1640液100ml。
(4)2.5%FCS-1640液50ml。
(5)HAT培养液100ml。
(6)50%PEG:取分子量4000,高纯度的(日本进口或Serva)PEG10g放入25ml瓶中高压灭菌,使用前用预热于40℃的1640液10ml等量(W/V)混合,以酚红检查pH,一般不必调pH。如pH有改变,可用HCl或NaHCO3调整。
(7)10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。
(8)40孔塑料培养盘。
2.操作方法
⑴准备好脾细胞。
⑵在50ml沉淀管中混合108脾细胞和107小鼠骨髓瘤细胞,并加入50ml2.5%FCS-1640液。
⑶室温400g离心3min,使细胞沉淀。
⑷移去上清液。
⑸轻敲管底部,使沉淀流动,把沉淀管放于40℃水浴中,使其达融合温度。
⑹加预热至40℃的50%PEG0.8ml,用1ml吸管缓慢滴加,边加边摇沉淀管,肉眼观察可见有颗粒出现,滴加过程要求持续2min。
⑺加1ml1640液,边加边摇动,持续1min。
⑻重复⑺一次。
⑼加1ml1640液,边加边摇动,持续0.5min。
⑽重复⑼一次。
⑾加1640液15ml。
⑿室温,400g离心1min,使细胞沉淀。
⒀去上清,轻敲管底部,加25ml含有HAT的完全1640液。
⒁往已于前一日种有饲养细胞的40孔塑料培养盘中滴加融合的细胞液,每孔1滴(约0.05ml)。
⒂轻摇后,放入5%CO2饱和湿度的37℃温箱中培育。
⒃第3、6、9、10日换入含HAT的完全1640培养液。注意轻轻吸取上清液,勿将固定于孔底的细胞吸出,根据需要加入适量的饲养细胞。
⒄于第12、15日加入含有HAT的完全1640培养液。在每次换液前用倒置显微镜观察,大约在10天左右就可观察到杂交瘤细胞生长出来。大多数杂交瘤细胞在10~20天内出现,但也有在1个月左右才能出现的。杂交瘤细胞出现后,吸取上清液,检查抗体。
⒅对继续生长的杂交瘤细胞进行增殖传代。在传代过程中,依情况取消HAT液和完全1640液而代之以10%FCS-1640液。同时保存于液氮和进行克隆化,在这期间每代都要检查抗体,以防止产生抗体细胞的变异和丢失。
主要特性:
①蛋白质的精细结构;
②淋巴细胞亚群的表面新抗原;
③组织相容性抗原;
④激素和药物的放射免疫(或酶免疫)分析;
⑤肿瘤的定位和分类;
⑥纯化微生物和寄生虫抗原;
⑦免疫治疗和与药物结合的免疫-化学疗法 。