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ELISA进行方法学开发时的基本原则吗？

你知道ELISA进行方法学开发时的基本原则吗？

对于亲和力测定方法和原理的概述，读者可参考生物功能学筛选评价技术之亲和力评价篇。

本文主要对饱和浓度法进行概括。
R代表受体或抗原，L代表配体或抗体。
采用饱和浓度法，如果要测定配体相对于受体的亲和力，少量R存在的情况下，将L进行梯度稀释，检测R-L复合物的浓度，当R-L复合物的浓度占总R浓度的一半时，L对应的浓度值（EC50）即L相对于R的KD值。

RL复合物/R即B值可用检测的信号值代替，梯度稀释的L和信号之间的函数关系满足下面的公式，只有在此在特定的实验条件下EC50值能够等价于KD值。

饱和浓度法测定KD值有几个关键点，即相互作用的两个分子，R要少量，L要进行连续的梯度稀释，需要得到*大的信号响应值（所有的R的结合位点被L占据）即平台期，那么在此条件下，占据一半R时，所需要的L浓度（EC50）为KD值。

饱和浓度法主要测定的是代表RL复合物的信号值，测定方法可以是流式细胞术、同位素标记术、荧光偏振，也可以是ELISA。

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