为食品加工工艺和防腐的需要，以及为了改善食品品质和色、味、香，在食品生产加工过程中，食品中通常会加入少量的天然或者化学合成的物质。*近几年，由于食品**问题层出不穷，人们越来越重视食品添加剂所带来的**隐患。而我们利用全新高性能的高效液相色谱仪，经实践检测可提供苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，适用于食品中苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的测定，仅供广大用户参考。以下是苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的详细检测方法。仪器与试剂1、仪器：高效液相色谱仪；色谱柱250mm×4.6mm×5μm；超声波水浴振荡器；食品粉碎机；pH计；天平：分度值为0.001mg。2、试剂：甲醇（色谱纯）；乙酸铵溶液（称取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000mL，经0.45μm微孔滤膜过滤）；亚铁溶液（称取106g亚铁[K3Fe(CN)6•3H2O]加水至1000mL）；乙酸锌溶液{称取220g乙酸锌[Zn(CH3COO)2•2H20]溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，加水稀释至l000mL）；氨水(1+1)

液相色谱仪根据固定相是液体或是固体，又分为液-液色谱(LLC)及液-固色谱(LSC)。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较，具有高效、快速、灵敏等特点。对高沸点、难气化合物的混合物通过色谱柱核淋洗剂并以实现分离。应用于生物化学、生物医学、环境化学、石油化工等部门。液相色谱仪3大系统系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的组成与特点。1．进样系统液相色谱仪一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。2．输液

关于高效液相色谱仪在操作时遇到的技术问题解答：常见问题整理如下1、高效液相色谱仪是如何实现高效、快速、灵敏这些特点的?解：气相色谱理论和技术上的成就为液相色谱的发展创造条件，从它的高效、高速和高灵敏渡得到启发，采用5一10四微粒出定相以提高柱效，采用高压泵加快液体流动相的流速;设计高灵敏度、死体积小的紫外、荧光等检测器，提高检测灵敏度，克服经典液相色谱曲缺点，从而达到高效、快速、灵敏。2、与气相色谱法相比高效液相色谱有哪些优点和不足?解：气相色谱的分析对象是在校温下具有一定的挥发性、对热稳定购物质。因此它只限于分析气体和沸点低的化合物或挥发性的衍生物。而高效液相色谱由于以液体作为流动相，只要被分析的物质在选用的流动相中有一定的按解度，便可以分析，所以适用性广，不受样品挥发性和热稳定性的限制，特别适合于那些沸点高、极性强、热稳定性差的化合物，例如，生化物质和**、离子型化合物、热稳定性差的天然产物等。在目前已知的有机化台物中，只有20%样品可不经化学处理而能满意地用气相色谱分离，80%的有机化合物要用高效液相色谱分析。气相色谱中流动相是惰性的，它对组分没有作用力，仅起运载作用、而高效液相

液相色谱仪各部分的养护：1、泵。泵是液相色谱仪的心脏。处于良好工作状态的泵，基线平稳，保留时间重现性好，梯度洗脱时压力变化缓慢而且平稳。1）选择**的溶剂和试剂，在进入仪器前用0.45um膜过滤，并进行脱气处理。2）泵开始使用时，一定要用合适的流动相彻底清洗干净。3）定期检查并更换在线过滤片及有关的垫圈，经常清洗进液处的微孔滤头。4）改变流动相时，应注意沉淀的产生，以防止泵堵塞。2、色谱柱。色谱柱是化合物分离的关键。保养良好的色谱柱具有很高的塔板数，基线平稳。1）色谱柱比较娇气不能够碰撞、弯曲或强烈震荡；安装时要保证阀件或管路的清洁。2）流动相在使用前必须进行脱气处理，尽量不使用或少使用高粘度的流动相。3）在满足灵敏度的前提下，尽可能的使用小进样量。如果样品比较脏，要进行净化或提纯处理。4）分析结束后要清洗掉进样阀中残留的样品，并用流动相或适当的溶剂清洗色谱柱。5）如长期不用，用适当的有机溶剂保存并封闭或定期补充合适的流动相。3、检测器分析完成后，马上关闭检测器。4、进样器分析结束后反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染或堵塞。

高效液相色谱仪概念及基本原理高效液相色谱定义及特点色谱法*早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。高效液相色谱法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(HighPressureLiquidChromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(HighSpeedLiquidChromatography，HSLP)。HPLC有以下特点：高压-压力可达150~300kg/cm2，色谱柱每米降压为75kg/cm2以上高速-流速为0.1~10.0mL/min高效-理论板数可达10000以上，在一根柱中同时分离成份可达100种高灵敏度-紫外检测器灵敏度为0.01ng，同时消耗样品少HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：速度快-通常分析一个样品在

一）压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。A、没有压力显示，没有流动相流动：原因解决方法1、电源问题接通电源，开机2、保险丝被烧坏更换保险丝3、控制器设定不正确或设定失败采取恰当的设定、、修理或更换控制器4、柱塞杆折断更换柱塞杆5、泵头内有空气溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足补充流动相、更换入口滤头7、单向阀损坏更换单向阀8、漏液拧紧或更换手紧接头B、流动相流动正常，但没有压力显示：原因解决方法1、仪表损坏更换仪表2、压力传感器损坏更换压力传感器C、压力持续偏高原因解决方法1、流速设定过高调整流速设定2、柱前筛板堵塞反冲色谱柱、更换筛板、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀使用恰当的流动相、冲洗柱塞杆。4、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏清洗或更换进样阀6、柱温过低提高温度7、控制器失常修理或更换控制器8、保护柱阻塞清洗或更换保护柱9、在线过滤器阻塞清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低：原因解决方法1、流速设定过低调整流速2、系统漏液确定漏液位置并维修3、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱4、柱温过高降低温度5、控制器失常维修或更换控制器E、压力波动：原因解决

●环境温度10?Ｃ～30?Ｃ，8小时内温度波动不超过±3℃，环境相对湿度低于85%。●严格按照使用说明书操作仪器，不得擅自更改操作步骤。●瓶内溶剂过滤器的维护●色谱柱的维护柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动。柱温一般不超过40℃。流动相使用前要脱气；避免使用高粘度的溶剂作为流动相。以硅胶为基质的柱子，如C-18、C-8等，要控制好流动相的pH值在3.0～8.0之间。进样样品要适当提取纯化，严格控制进样量，避免超负荷进样。对250×4.6mm的柱子，每次**进样量应不超过100μg。避免柱头突然产生大的压力波动，扰动损伤柱床。泵启动过速、升压过快、样品阀搬动过慢等到，均可造成的柱压大的波动。每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来充分清洗色谱柱。对反相柱，可先用足量的等比例的水彻底洗净其中的酸、碱或盐类，再用甲醇或乙腈冲洗。若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭。反相柱可保存在甲醇或乙腈中，正相柱保存在非极性有机溶剂（如己烷）中。●进样阀的维护进样时，进样针应插到底。不使用时将针头留在进样器内。进样时应使用液相色谱专用平头进样针。常用密封垫的材

液相色谱仪常见故障及处理方式液相色谱仪是利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。液相色谱仪在生物化学、生物医学、环境化学、石油化工等领域均有广泛应用。那���，液相色谱仪在使用中有哪些常见故障?又该如何处理呢?1、柱压高原因：缓冲液盐分沉积于柱内;或者是样品污染沉积。措施：如果是缓冲液盐分沉积于柱内，则用40～50℃的纯水低速正向冲洗柱子，逐渐提高流速冲洗，柱压大幅度下降后再用常温纯水清洗，*后用纯甲醇冲洗柱子30分钟。如果是样品污染沉积导致，则用纯水反向冲洗柱子，再用甲醇冲洗，随后用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子，再用甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，*后用甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟。2、气泡溢出原因：主要是由于过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，内部霉菌繁殖形成菌团阻塞了过滤器导致。措施：将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，利用超声清洗既分钟。或者将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，再用纯水清洗，打开purge键清洗脱气，直到没有气泡冒出。打开泄压阀，打开泵，纯水冲洗过滤器1小时左右。3、无压力指示，也无液体流过原因：泵密封垫圈磨损;或大

杭州森尼欧提供液相色谱仪色谱柱的选择指南现代高效液相色谱仪色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。一、硅胶基质填料：1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其它具有极性官能团,如胺基团（NH2,APS）和氰基团（CN,CPS）的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其它极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组份的极性大小，即极性较弱的组份*先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正己烷（Hexane）、氯仿（Chloroform）、二氯甲烷（MethyleneChloride）等。2、反相色谱反相色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组份*先被冲洗出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有：C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。二、聚合物填料聚合物填

液相色谱仪广泛应用于各种科研、生产领域中，在日常研究生产使用中我们会遇到一些问题，下面我们就介绍下液相色谱仪使用中常见故障的解决方式。1、气泡溢出液相色谱仪的流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开液相色谱仪的purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法**不断产生的气泡。原因，液相色谱仪的过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过液相色谱仪的滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从液相色谱仪的过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0～3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过液相色谱仪的滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可

高效液相色谱仪(梯度)型号；HA-FL2200FL2200型高效液相色谱仪是在原有的FL2200高效液相色谱仪的基础上经过优化的升级换代产品，可以选配在线清洗装置，并且兼容FL2200反控液相色谱工作站和通用色谱工作站，新颖的外观，更高的可靠性、稳定性和易操作性，是您实验室的*佳选择。仪器特点双光束单色器，双透镜流过池，追求超高灵敏度采用进口氘灯、光电池，1200条/mm凹面光栅组成的双光束单色器，精密加工的双透镜流过池，高精度微处理器控制波长调节，双路高速采样的24位A/D，确保了检测器的低噪声、低漂移及超高灵敏度，媲美进口同类仪器水平。**压力反馈控制系统，*大限度减少系统死体积采用先进的压力反馈控制系统，摒弃了死体积较大的管路混合器，不仅大大减少了流路死体积，也因压力反馈变速技术的使用，提高了泵流量的稳定性。灵活的模块化结构，多种分离、检测模式等度分离模式、梯度分离模式、时间流量程序分离模式、单波长检测模式、停流波长扫描检测模式和时间波长程序检测模式。FL2200液相工作站控制的仪器具有智能化的监控系统，具备仪器自检、自我校正等功能技术参数FL2200高压输液泵往复式双柱塞串联泵

高效液相色谱仪的主要类型液固吸附色谱1.1分离原理液固色谱是基于各组分吸附能力的差异进行混合物分离的，其固定相是固体吸附剂。1.2固定相;吸附色谱固定相可以分为极性和非极性两大类。1.3流动相;流动相要求：1.3.1选用的溶剂应当与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性1.3.2选用的溶剂应有高纯度，以防所含微量杂质在柱中积累，引起柱性能的改变。1.3.3选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配，如果使用紫外吸收检测器，就不能选用在检测波长下有紫外吸收的溶剂;若使用示差折光检测器，就不能用梯度洗脱。1.3.4选用的溶剂应对样品有足够的溶解能力，以提高测定的灵敏度。1.3.5选用的溶剂应具有低的黏度和适当低的沸点。1.3.6应尽量避免使用具有显著毒性的溶剂，以保证工作人员的**1.4应用液固色谱是以表面吸附性能力为依据的，所以它常用于分离极性不同低的化合物，也能分离那些具有相同极性基团，但数量不同的样品。液液分配色谱1.1分离原理;分配色谱法的原理与液液萃取相同，都是分配定律。1.2固定相;分配色谱固定相由两部分组成，一部分是惰性载体，另一部分是涂渍在惰性载体上的固定液。1.3流动相;分内

高效液相色谱仪的应用高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合，HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。HPLC成为解决生化分析问题*有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。液相色谱-质谱连用技术受到普遍重视，如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等;液相色谱-红外光谱连用也发展很快，如在环境污染分析测定水中的烃类，海水中的不挥发烃类，使环境污染分析得到新的发展。

高效液相色谱仪的故障处理及注意事项流动相内有气泡，关闭泵，打开泄压阀，打开purge键，清洗脱气，气泡不断从过滤器冒出，进入流动相，无论打开purge键几次，都无法**不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge键，清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。故障2柱压高原因⑴缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;⑵样品污染沉积。处理对于**种情况先用40～50℃的纯水,低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降

高效液相色谱仪的工作原理及系统组成高效液相色谱仪的工作原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。高效液相色谱仪的理解分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关，也与温度、压力有关。在不同的色谱分离机制中，K有不同的概念：吸附色谱法为吸附系数，离子交换色谱法为选择性系数(或称交换系数)，凝胶色谱法为渗透参数。但一般情况可用分配系数来表示。在条件(流动相、固定相、温度和压力等)一定，样品浓度很低时(Cs、Cm很小)时，K只取决于组分的性质，而与浓度无关。这只是理想状态下的色谱条件，在这种条件下，得到的色谱峰为正常峰;在许多情况下，随着浓度的增大，K减小，这时色谱峰为拖尾峰;而有时随着溶质浓度增大，K也增大，这时