高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的组成与特点。1.进样系统一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。2.输液系统该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47～4.4X107Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。3.分离系统该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10～50cm(需要两根连用时，可在二者之间加一连接管)，内径为2～5mm，由"**不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成).固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有

1．HPLC的日常操作条件：温度：10—30℃；相对湿度<80％；*好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。2．泵的保养：1)使用流动相尽量要清洁；2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗；3)流动相交换时要防止沉淀；4)避免泵内堵塞或有气泡;3．进样器的保养：1)每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染；4．柱的保养：1)柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；2)当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净；3)要注意流动相的脱气；4)避免使用高粘度的溶剂作为流动相；5)进样样品要提纯；6)严格控制进样量；7)每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；8)每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；9)若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭；5．检测器(UV)的保养：1)紫外灯的保养：在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。2)样品池要保养。

高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送(*高输送压力可达4.9´107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万)；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。特点1．高压：液相色谱法以液体为流动相(称为载液)，液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。2.高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h。3.高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气

1、色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死(如ACN适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相)2、对于手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。3、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水(易长菌)。维护知识问答1、为什么溶剂和样品要过滤?溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除由于污染对分析结果的影响。)色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。2、HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。3、流动相使用前为什么要脱气?流动相使用前必须进行脱气处理，以除去其中溶解的气体(如O2)，以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析。溶解的氧气还会导致样品

双黄连口服液—连翘苷的含量—二手高效液相色谱仪测定双黄连口服液应用范围：本方法采用二手高效液相色谱仪测定双黄连口服液中连翘苷含量。本方法适用于由金银花,黄芩,连翘等精制而成的双黄连口服液中连翘苷的含量测定。方法原理：反相固相萃取法处理样品,再以反相高效液相色谱作定量分析;色谱条件:PRODIGYODS(150mm×4.6mm,5μm)C18柱为色谱柱,甲醇水冰醋酸=40601为流动相,检测波长为227nm。连翘苷色谱峰与其它色谱峰分离良好。试剂：1.甲醇(色谱纯)2.冰醋酸(分析纯)仪器设备：1仪器1.1二手高效液相色谱仪测定双黄连口服液1.2色谱柱C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)，Sep-PakC18微柱2色谱条件2.1流动相：甲醇水冰醋酸=406012.3柱温：35℃2.4流速：1.0mL/min2.5检测波长：227nm试样制备：1.标准溶液的制备取连翘苷对照品5mg,精密称定,加40%甲醇溶液溶解并稀释至25mL,为0.2mg·mL-1的对照品溶液,再分别吸取上述溶液适量,各加40%甲醇溶液

一台品质优良的液相色谱仪'>液相色谱仪的选择应从以下几个方面考虑：一.主要技术指标优异：首先是如何看指标。液相色谱仪的指标很多，有泵的、检测器的、色谱柱等等。我们认为要看主要技术指标，根据国家标准，仪器的主要指标有噪音，漂移，*小检测浓度，定性定量重复性等。这些指标都要放在系统，回路里去看，去比较。就是需要把各单元装置都要联接好，如接好色谱柱，进样阀，并且要通上流动相。因为您在分析中也都是联接好以后才可以进行分析的，而不是单单用个检测器或是泵的。然后在这个基础上，我们再去比较这些主要指标。1.噪音噪音是指由仪器的电器元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规则波动。噪音的大小直接关系到仪器的检测灵敏度，噪音越大，检测的灵敏度就越低。对于检测低含量的样品就要求仪器的噪音越小越好，否则噪音过大将会导致基线不稳，甚至影响分析结果。2.*小检测浓度(*小检测限)*小检测浓度是反映仪器灵敏度的重要参数。CL=2×Nd×C/H(CL：*小检测浓度Nd:噪音C：样品浓度*小检测浓度H：样品峰高)由上式可见，*小检测浓度是和噪音成正比的，噪音越大

随着科学的发展，液相色谱在化学分析领域的应用发展迅速.广大实验人员在使用高效液相色谱仪'>液相色谱仪的过程中，管路的堵塞是常发生的故障之一.下文为您介绍液相色谱管路堵塞的原因与解决方法.液相色谱管路阻塞的原因：1.没有很好过滤流动相;2.样品中有微粒;3.泵或进样器垫圈产生碎片;4.预柱、护柱和分析柱中漏出填料;5,毛刺和锉屑进入;6.流动相中的结晶盐;7.微生物8.系统中进入了其它颗粒性物质。液相色谱管路阻塞解决方法：系统中管路阻塞的现象很少见，常见的是烧结过滤片(玻璃砂芯)阻塞。用烧结过滤器'>过滤器或过滤片(孔径2-10um)能去掉阻塞管路的微粒(如0.25mm管径)。用系统分段法检查阻塞的管路，从后向前分别松开接头检查，找到阻塞管路后，应立即拆下来疏导或换新。如果是非刚性物质阻塞，如生物样品中的生化物质(蛋白质)、微生物等，可用极细的金属丝导通，也可以在火头上烧一烧，使有机物炭化，而后再导通。如果是刚性物质阻塞，要导通则十分困难，采用反冲的办法有时能成功。就是将管子调头用泵冲洗。操作时要注意保护眼睛和裸露的皮肤，因阻塞物会以很高的速度冲出来。无法导通的管路要换上同样规格的管子。

应用范围：本方法采用二手高效液相色谱法分析青霉素含量。本方法适用于注射用青霉素钠。方法原理：供试品经水溶解并定量稀释，进入二手高效液相色谱仪法进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长225nm处检测青霉素钠的峰面积，计算出其含量。试剂：1.乙腈2.磷酸3.0.1mol/L磷酸二氢钾溶液仪器设备：1.仪器1.1二手高效液相色谱仪1.2色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按青霉素钠峰计算应不低于1600。1.3紫外吸收检测器2.色谱条件2.1流动相：0.1mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至2.5)乙腈=70302.2检测波长：225nm2.3柱温：室温2.4流速：1mL/min试样制备：1.对照品溶液的制备精密称取青霉素对照品适量，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.5mg的溶液，摇匀，即为对照品溶液。2.供试品溶液的制备精密称取供试品装量差异项下的内容物适量，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.5mg的溶液，摇匀，即为供试品溶液。注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准

液相色谱仪'>液相色谱仪操作步骤:1、打开电脑2、打开主机、预热3、进入仪器工作站，联机并设定仪器使用方法及仪器参数4、启动泵的动力系统预处理(排气等)5、检查是否漏夜、柱压是否正常6、设置仪器方法，包括仪器的使用条件等7、激活操作方法，等待仪器平衡、基线平直8、仪器出现“Ready”后可进行样品分析9、操作测试结束后，清理所有实验材料，做好清洁卫生10、记录仪'>记录仪器使用日志，并与管理员办理交接手续液相色谱仪注意事项:1、高效液相色谱的流动相应采用色谱纯溶剂，以满足仪器要求、避免损坏色谱柱;2、严禁使用有污染的水等冲洗色谱柱，避免将互不相溶的溶剂一同进入泵内;3、流动相需经过滤、除气后方可使用;4、待分析的样品必须彻底溶解澄清、过滤，以避免堵塞、损坏色谱柱;5、分析完成后，须注意及时清洗色谱柱和检测器的比色池。

高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送(*高输送压力可达4.9´107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。一、特点：1.高压：液相色谱法以液体为流动相(称为载液)，液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。2.高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h。3.高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。

一.主要技术指标优异：首先是如何看指标。液相色谱仪'>液相色谱仪的指标很多，有泵的、检测器的、色谱柱等等。要看主要技术指标，根据国家标准，仪器的主要指标有噪音，漂移，*小检测浓度，定性定量重复性等。就是需要把各单元装置都要联接好，如接好色谱柱，进样阀，并且要通上流动相。因为您在分析中也都是联接好以后才可以进行分析的，而不是单单用个检测器或是泵的。然后在这个基础上，再去比较这些主要指标。1.噪音噪音是指由仪器的电器元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规则波动。噪音的大小直接关系到仪器的检测灵敏度，噪音越大，检测的灵敏度就越低。对于检测低含量的样品就要求仪器的噪音越小越好，否则噪音过大将会导致基线不稳，甚至影响分析结果。2.*小检测浓度(*小检测限)*小检测浓度是反映仪器灵敏度的重要参数。CL=2×Nd×C/H(CL：*小检测浓度Nd:噪音C：样品浓度*小检测浓度H：样品峰高)由上式可见，*小检测浓度是和噪音成正比的，噪音越大，*小检测浓度就越大，灵敏度就越低。某些厂家回避了这个指标，说明他们不愿在*小检测浓度的基础上去比较噪音。

液相色谱仪'>液相色谱仪由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪'>记录仪等几部分组成。下面介绍下液相色谱仪常见故障的处理方法。1、柱压高原因(1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;(2)样品污染沉积。处理对于**种情况先用40～50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于**种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,*后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。2、流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法**不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中1

1.高效液相色谱仪基本配置高压输液泵：等度或梯度紫外或二极管阵列检测器手动进样阀或自动进样器色谱工作站"href="http://www.18show.cn/product/st621.html"target="_blank">色谱工作站强阳离子交换色谱柱(SCX)：4.6×250mm，5µm(或性能相当者)2.液相色谱仪验收指标与方法2.1检定指标高压输液泵、紫外(二极管阵列)检测器和整机性能满足《液相色谱仪检定规程》(JJG705-2002)要求：表1流量设定值误差SS和流量稳定性误差SR的要求整机性能：仪器的整机性能用定性定量测量重复性表示。定性测量重复性(6次测量)RSD：不超过1.5%。;定量测量重复性(6次测量)RSD：不超过3.0%。2.2方法现场验收指标按照国家标准方法实验，仪器能够满足三聚氰胺检测限与定量限的要求。检测限：0.05mg/kg;定量限：0.3mg/kg。