iPS细胞培养添加剂（配套）

细胞培养的优点：

1.研究的对象是活细胞

在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。

2.研究条件可以人为控制

pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。

3.研究的样本可以达到比较均一性

通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。

4.研究内容便于观察、检测和记录

采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

冷冻保存细胞之方法

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。

冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

培养操作：

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.

细胞处理方法：

以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理，如需要更详细技术指导。

一．贴壁细胞

客户接收到细胞，用75%的酒精（建议配制75%酒精的水是过的）培养瓶外部。

肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。

显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。

严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。

用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2  培养。

二．悬浮细胞

1. 接收到细胞，用75%的酒精（建议配制75%酒精的水是过的）培养瓶外部。

2. 肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。

3. 严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。

5. 1000rpm,5min离心，重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2培养。

产品应用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

（石蜡切片需做抗原修复）

 not yet tested in other applications.

 optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.  

保存条件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

Important Note  This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

产品介绍 PDK1 (3 Phosphoinositide Dependent Protein Kinase 1) phosphorylates AGC kinases. PDK1 activates conventional PKC and PKC zeta through phosphorylation of critical threonine residues in the activation loop. PDK1 also phosphorylates Protein Kinase B (PKB) at threonine 308 in the presence of phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate. Active Akt inactivates Glycogen Synthase Kinase 3 (GSK3), eventually leading to the dephosphorylation and activation of glycogen synthase and the stimulation of glycogen synthesis. Because of the role that PDK plays in insulin-induced glycogen synthesis and PKC activation it is a potentially important target for metabolic drug research. There are three named isoforms.

Function : Phosphorylates and activates not only PKB/AKT, but also PKA, PKC-zeta, RPS6KA1 and RPS6KB1. May play a general role in signaling processes and in development (By similarity). Isoform 3 is catalytically inactive.

Subunit : Interacts with NPRL2.

Subcellular Location : Cytoplasm. Membrane; Peripheral membrane protein. Note=Membrane-associated after cell stimulation leading to its translocation. Tyrosine phosphorylation seems to occur only at the plasma membrane.

Tissue Specificity : Appears to be expressed ubiquitously.

Post-translational modifications : Phosphorylated on tyrosine and serine/threonine. Phosphorylation on Ser-241 in the activation loop is required for full activity. PDK1 itself can autophosphorylate Ser-241, leading to its own activation.

Similarity : Belongs to the protein kinase superfamily. AGC Ser/Thr protein kinase family. PDK1 subfamily.

Contains 1 PH domain.

Contains 1 protein kinase domain.

PDK1是蛋白激酶B(PKB)的上游激酶,通过与3,4,5三磷酸磷脂酰肌醇作用激活相邻的PKB分子.PDK1能够激活包含PKB在内的一系列的AGC激酶家族成员.从而调节细胞代谢,生长,扩散,生存,抗凋亡等诸多生理过程.

英文名称  Anti-p53BP1/53BP1

中文名称  p53结合蛋白1抗体
iPS细胞培养添加剂（配套）整合素β4检测试剂盒双组份无吡啶滴定剂 5mg水/ml,测含水量较高样品。 2瓶500毫升为烯硫 99%

整合素β5检测试剂盒双组份无吡啶滴定剂 3mg水/ml,测常规样品烯基基二硫 90%

整合素β3检测试剂盒双组份无吡啶滴定剂 2mg水/ml,测含水量较低样品2-乙酰吡咯 99%

钙蛋白酶1检测试剂盒双组份无吡啶滴定剂 1mg水/ml,测含水量较低样品2-乙酰基-2-噻唑啉 97%

美丽线虫凋亡基因检测试剂盒双组份无吡啶溶剂 用作反应介质2,3-丁二硫 98%

保护素检测试剂盒容量法双组份含吡啶溶液A 3mg水/1mlA+B,测定常规样品双 (2-甲基-3-呋喃基)二硫 98%

S100钙结合蛋白A6检测试剂盒单组份卡尔费休试剂（测酮类样 5mg水/ml，测水量较高样品2,5-二甲基-2,5-二羟基-1,4-二噻烷 95%