H9人类胚胎干细胞培养体系

培养方法

传代方法 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件 37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

存储条件 冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

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培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Subunit : AMPK is a heterotrimer of an alpha catalytic subunit (PRKAA1 or PRKAA2), a beta (PRKAB1 or PRKAB2) and a gamma non-catalytic subunits (PRKAG1, PRKAG2 or PRKAG3). Interacts with FNIP1 and FNIP2.

Tissue Specificity : Highly expressed in kidney, heart, white adipose tissue, lung and spleen.

Post-translational modifications : Phosphorylated when associated with the catalytic subunit (PRKAA1 or PRKAA2). Phosphorylated by ULK1; leading to negatively regulate AMPK activity and suggesting the existence of a regulatory feedback loop between ULK1 and AMPK.

Similarity : Belongs to the 5'-AMP-activated protein kinase beta subunit family.

Database links :

Entrez Gene: 5564 Human

Entrez Gene: 19079 Mouse

Entrez Gene: 83803 Rat

Omim: 602740 Human

SwissProt: Q9Y478 Human

SwissProt: Q9R078 Mouse

SwissProt: P80386 Rat

Unigene: 6061 Human

Unigene: 726001 Human

Unigene: 458152 Mouse

Unigene: 3619 Rat

AMPKβ1(AMP-activated Protein Kinase beta-1)(腺苷单磷酸活化蛋白激酶β-1)是一种参与细胞适应能量危机的应激反应酶,AMPK不仅可以在细胞水平作为能量的感受器，还可以通过和细胞因子，如瘦素、脂联素和ghrelin来参与调节机体的能量消耗和能量摄入.

英文名称  Anti-phosphos-PCNA (Tyr211)
H9人类胚胎干细胞培养体系抗凝血因子3检测试剂盒三异 95%3-(2-呋喃基)烯 99%

趋化因子C-C-基元配体2检测试剂盒(±)-樟脑（合成） 96%甲基糠基二硫 98%

趋化因子C-C-基元配体4检测试剂盒AR,99.5%反,反-2,4-庚二烯 90%

肾酶检测试剂盒CP,99.5%三硫酮 ≥99%, FG

抗原215检测试剂盒GR,99.8%4-羟基-3-甲氧基苯甲 98%

亮氨酸氨肽酶3检测试剂盒PT,99.8%六氯酮 99%

可溶性CD44分子检测试剂盒光谱级2-异基-4-甲基噻唑 98%

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。