原代星形胶质细胞培养体系

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

培养方法

传代方法 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件 37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

存储条件 冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

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培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

保存条件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two : Binds in vitro to vinculin as well as to the SH3 domain of SRC and, when tyrosine phosphorylated, to the SH2 domain of V-CRK. Isoform beta binds to PTK2/FAK1 but weakly to vinculin. Isoform gamma binds to vinculin but only weakly to PTK2/FAK1. Interacts with GIT1, NUDT16L1/SDOS and TGFB1I1. Component of cytoplasmic complexes, which also contain GIT1, ARHGEF6 and PAK1 (By similarity). Interacts with PTK2/FAK1 and PTK2B/PYK2. Binds ASAP2. Interacts with unphosphorylated ITGA4. Interacts with RNF5 and PDCD10. Interacts with NEK3 and this interaction is prolactin-dependent. Interacts with PTK6. Interacts with SORBS1, Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: P49023.3

Paxillin是一种分子量为68KDa的局部粘附蛋白，参与肿瘤细胞的粘附与转移。主要用于各种恶性肿瘤的研究。 Paxillin 蛋白是胞外基质细胞粘附（粘着斑）位点上肌动蛋白-膜附着的细胞骨架蛋白。 Paxillin 在整合蛋白的信号传导中起着非常重要的作用，整合蛋白介导的细胞骨架的再组织需要，paxillin 酪氨酸残基的磷酸化。 Paxillin 被粘着斑激酶 (FAK)在其118位的酪氨酸残基处磷酸化。已经证明，paxillin 118位和31位两个酪氨酸的磷酸化对于MM1癌细胞的迁移是重要的。

英文名称  Anti-PRDM1/Blimp1

中文名称  B细胞诱导成熟蛋白1抗体

别    名  Blimp 1; Blimp-1; B Lymphocyte Induced Maturation Protein 1; Beta interferon gene positive regulatory domain I binding factor; Beta-interferon gene positive regulatory domain I-binding factor; BLIMP-1; BLIMP1; Positive Regulatory Domain I Binding Factor 1; Positive regulatory domain I-binding factor 1; PR Domain Containing 1; PR domain containing 1 with ZNF domain; PR domain containing 1 with ZNF domain isoform 2; PR domain containing protein 1; PR domain zinc finger protein 1; PR domain-containing protein 1; PRDI BF1; PRDI binding factor 1; PRDI-BF1; PRDI-binding factor 1; PRDM 1; Prdm1; PRDM1_HUMAN.

浓    度  1mg/1ml

规 格  0.2ml/200μg

抗体来源  Rabbit  

克隆类型  polyclonal
原代星形胶质细胞培养体系总蛋白s检测试剂盒二乙烯三五乙酸  CP乙偶姻 Natural,≥96%（GC), FCC

总蛋白s检测试剂盒二乙烯三五乙酸  AR,99.0%2,3-丁二酮 98%

血小板**素检测试剂盒盐酸二 99%磷酸二氢锰 CP

钙结合蛋白检测试剂盒盐酸二乙 CP，98%磷酸二氢锰 AR

谷胱甘肽过氧化物酶1检测试剂盒盐酸二乙 AR，99%茜素绿 AR

抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体检测试剂盒盐酸乙二 AR,99%2,2'-联吡啶-4,4'-二甲酸 96%

血小板衍化生长因子CC检测试剂盒甲酰 CP,99.0%磷酸二氢锰 AR