原代黑色素细胞培养体系

细胞培养的优点：

1.研究的对象是活细胞

在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。

2.研究条件可以人为控制

pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。

3.研究的样本可以达到比较均一性

通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。

4.研究内容便于观察、检测和记录

采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

培养操作：

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.

细胞处理方法：

以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理，如需要更详细技术指导。

一．贴壁细胞

客户接收到细胞，用75%的酒精（建议配制75%酒精的水是过的）培养瓶外部。

肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。

显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。

严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。

用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2  培养。

二．悬浮细胞

1. 接收到细胞，用75%的酒精（建议配制75%酒精的水是过的）培养瓶外部。

2. 肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。

3. 严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。

5. 1000rpm,5min离心，重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2培养。

冷冻保存细胞之方法

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。

冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

储 存 液  0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide

产品应用   ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

（石蜡切片需做抗原修复）

 not yet tested in other applications.

 optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.  

保存条件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

Important Note  This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

产品介绍

猪乙型脑炎是由日本乙型脑炎引起的人畜共患传染病，俗称“乙脑”,依靠蚊子进行传播,具有严格的季节性。各种年龄、品种、性别的猪均易感染此病。猪感染本病后，母猪常发生流产、死胎，公猪发生睾丸炎，育肥猪可持续高热，仔猪常呈脑炎症状。猪乙脑结构蛋白是粒子的主要成分, 也是维持形态结构的主要物质，结构蛋白包括衣壳蛋白C、毒粒包膜蛋白M (由P reM 切割而来) 和包膜蛋白E.

英文名称  Anti-PLAP/Phospholipase A2 activator protein

中文名称  磷脂酶A2激活蛋白抗体

别    名   Glycerophosphatase; Phospholipase A 2 activating protein; Phospholipase A2 activating protein; PLA2P; PLAA; PLAP.

浓    度  1mg/1ml

规 格  0.1ml/100μg  0.2ml/200μg

抗体来源  Rabbit  

克隆类型  polyclonal

交叉反应  Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

产品类型  一抗    
原代黑色素细胞培养体系乙二酶检测试剂盒NA-酸酐 99%丹参酮IIA  分析标准品，≥98%

幽门螺旋杆菌IgG抗体检测试剂盒盐酸喹那普利 98%丹参酮IIA  98%

核苷酸磷酸脱氢酶同工酶检测试剂盒四甲基氢氧化铵 AR,25%水溶液对酚 AR

幽门螺旋杆菌IgM抗体检测试剂盒四甲基氢氧化铵 AR,25%甲溶液对酚 分析标准品, ≥99.5% (HPLC)

L抗原家族成员3检测试剂盒四甲基氢氧化铵溶液 10%水溶液对酚标准溶液 1000μg/ml，溶剂：甲

α肾上腺素能受体检测试剂盒四甲基氢氧化铵溶液 10%甲溶液对酚标准溶液1.00mg/ml，基体：甲

尿激肽原1检测试剂盒四乙基溴化铵 98%对酚标准溶液1009mg/L,溶剂:甲