原代基质细胞培养体系

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培养方法

传代方法 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件 37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

存储条件 冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Similarity : Belongs to the perilipin family.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: O60240.2

    脂肪细胞中贮存的甘油三酯的水解是人和动物体内精细调节的动态平衡过程，与维持机体能量的动态平衡和代谢正常密切相关。Perilipin A是成熟脂肪细胞中脂滴膜上表达量较多的一种结构和功能蛋白，是多条脂解通路的终末靶点之一，对脂肪细胞的脂肪分解起着关键的调控作用.

    perilipin可能在脂肪分解调控中起到“分子开关”的作用。蛋白激酶A（PKA）、细胞外信号调节激酶（ERK）等信号转导通路参与了脂肪分解。肿瘤坏死因子仅（TNFα）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAγ）激动剂、瘦素（leptin）均可以影响perilipin的表达。近年来研究，perilipin可通过蛋白酶体途径来调节其蛋白量的表达。脂肪分解调控中的关键蛋白perilipin对2型糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化等多种代谢性及心血管相关联。

英文名称  Anti-PABP

中文名称  多聚腺苷酸结合蛋白抗体

别    名  PAB 1; PAB1; PABP 1; PABP1; PABP-1; PABPC 1; PABPC1; PABPC2; PABPL1v Poly A binding protein 1; Poly A binding protein cytoplasmic 1; Polyadenylate binding protein 1.

浓    度  1mg/1ml

规 格  0.1ml/100μg  0.2ml/200μg

抗体来源  Rabbit  

克隆类型  polyclonal

交叉反应  Human, Mouse, Rat, Pig, Horse, Rabbit

产品类型  一抗    

研究领域  学 信号转导 转录调节因子  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 70kDa

性    状  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human PABP

亚    型  IgG
原代基质细胞培养体系磷酸化tau检测试剂盒积雪草苷 分析标准品，≥97%聚烯酸钠 average Mw 400万-500万

腮腺炎病IgM抗体检测试剂盒戴斯-马丁试剂 96%四丁基溴化铵 AR,99.0%

水痘带状疱疹病IgM抗体检测试剂盒地奥司明 分析标准品4-乙酰氧基苯甲酸  99%

RNA结合基元蛋白8检测试剂盒地奥司明 95%4-基苯甲酸 98%

CXC趋化因子配体1检测试剂盒二氟溴乙酸乙酯 97%柠酸 97%(T)

轮状病检测试剂盒氢加兰他敏 98%4-乙 98%

甲酰甲硫氨酸检测试剂盒二氢黄酮甙 97%L-(-)樟脑磺酸 99%