高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（*高输送压力可达4.9´107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。特点1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。2.高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h。3.高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气

一台品质优良的液相色谱系统应从以下几个方面考虑：一.主要技术指标优异：首先是如何看指标。液相色谱仪的指标很多，有泵的、检测器的、色谱柱等等。我们认为要看主要技术指标，根据国家标准，仪器的主要指标有噪音，漂移，*小检测浓度，定性定量重复性等。这些指标都要放在系统，回路里去看，去比较。就是需要把各单元装置都要连接好，如接好色谱柱，进样阀，并且要通上流动相。因为您在分析中也都是连接好以后才可以进行分析的，而不是单用单个检测器或泵的。然后在这个基础上，我们再去比较这些主要指标。1.噪音是指由高效液相色谱仪的电器元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规则波动。噪音的大小直接关系到仪器的检测灵敏度，噪音越大，检测的灵敏度就越低。对于检测低含量的样品就要求仪器的噪音越小越好，否则噪音过大将会导致基线不稳，甚至影响分析结果。2.*小检测浓度(*小检测限)是反映仪器灵敏度的重要参数。CL=2×Nd×C/H(CL：*小检测浓度Nd:噪音C：样品浓度*小检测浓度H：样品峰高)由上式可见，*小检测浓度是和噪音成正比的，噪音越大，*小检测浓度就越大，灵敏

高效液相色谱仪操作步骤(原文摘录自网络)：1).过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。2).对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3).打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪)，连接好流动相管道，连接检测系统。4).进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5).有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。6).调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。7).设计走样方法。点击file，选取se-lectusersandmethods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loa

流动相：1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；2、水相流动相需经常换（一般不超过2天），防止长菌变质；3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。样品：1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；3.手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍；色谱柱：1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；2、使用符合要求的流动相；3、使用保护柱；4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；6、不要高压冲洗柱子；7、不要在高

用安捷伦液相色谱仪Agilent1200分析三聚氰胺三鹿事件”再次敲响了食品**的警钟，也引起全社会广泛关注。安捷伦仪器有限公司结合多年液相色谱仪和色谱柱研制、开发及应用的经验，利用*新研制的1200液相色谱仪和全新开发的Elite-MSP专用分析柱，不仅对三聚氰胺有很好的保留，获得**的峰形，而且能有效分离样品中可能存在的干扰物质。该方法准确性好、灵敏度高、线性范围宽、性能稳定、易于推广，投资省。配套采用安捷伦分析仪器有限公司的P系列等度紫外检测系统，并辅助DAD光谱定性功能，能用*低的投入准确完成三聚氰胺样品的定性及定量分析。色谱条件（农业部标准）色谱柱：EliteMSP5µm,ID4.6mm×250mm流动相：乙腈/缓冲液，10/90(缓冲液中含10mM柠檬酸，10mM庚烷磺酸钠)流量：1.0mL/min检测波长：UV240nm进样量：10µL柱温：40℃注：奶粉样品及标准品均取自大连市产品质量监督检验所。液相色谱仪仪器配置项目仪器名称数量11200四元高压恒流泵1台2紫外可见波长检测器1台3高压进样阀1只4色谱数据处理工作站1套5

理化分析实验室的*主要固定资产就是大型分析仪器，下面就以维护与保养为起点，谈谈分析仪器的可持续运行保证。大型分析仪器经常给人一种“娇嫩”的感觉，发生故障后的维修费用通常也是惊人的。其实如果使用得当，保养得法，完全可以也应当正常运转相当长时间，如我们这里一台1984年引进的岛津GC-9A，至今已经二十年，仍然在一线工作中发挥作用。学习使用分析仪器并不难，做得好做得准就有一定难度，但真正难的是如何保证使其长时间可持续正常运行的状态。我们不应该在仪器有故障反映时才想到应该对仪器进行维护了，不仅要定期有目的地做，还要树立一个观念：维护与保养的一个重要作用就是保障保证一个良好的检测状态，确保得到准确的检测数据。影响分析仪器的可持续运行有因素主要有：1、易损件清理更换不及时、2、硬件使用不科学、3、仪器本身选购及配置不当。各种分析仪器从结构、功能、应用各方面差别极大，但是经常出的问题以及维护保养的方向还是有一定的共性。这种共性就是：“仪器本身各个固定部件很少出问题，只有使用者经常接触到的地方才容易出故障”。

紫外可见吸收光谱法-液相色谱仪利用物质分子对紫外可见光的吸收光谱，对物质的组成含量和结构进行分析测定的方法。该方法具有灵敏度高、准确度好、选择性优操作简便、分析速度好、应用广泛等特点。其测定波长范围为200-1000nm。原理：物质的分子的电子能级、振动能级都是量子化的，只有当辐射光子的能量恰好等于两能级间的能量差(两能级间的能量差与分子中价电子的结构有关)时，分子才能吸收能量。某一种分子的结构是确定的，所以一种分子只能吸收波长在一定范围内光子。我们就可以通过测量分子对其所吸收的光子的波长范围，来确定分子的结构。分子光谱特点：分子光谱与原子光谱不同，它是一种连续的宽的吸收带，而不是简单的锐线光谱。紫外可见吸收光谱仪的基本结构一般由：光学系统、机械系统和电学系统三部分组成。应用：紫外可见分光光度法在有机物定性分析中有着广泛的应用，在无机物方面用于矿物、半导体、天然产物和化合物的研究。紫外可见分光光度法在定性方面主要依靠化合物的光谱特征，如吸收锋数目、位置、形状与标准光谱相比较，来确定某些基因的存在。尽管紫外可见分光光度法是一种比较常用的方法，但是，在一些情况下它不能单独用来确定一个未知化

高效液相色谱有四方面重要的作用。①分离分析**的组分含量：由于一种药剂常含有多组分，一次即可��各维生素B6、D1、A、E同时分离并定出含量。又如止痛药或退烧药也可用此法分离并测得各组分的含量。②**生产中进行中间控制：生产**素时，首先要了解发酵液中的主体与付产物的存在情况。例如：青霉素、四环素、头孢子菌素、红霉素、柔红霉素、庆大霉素等的发酵产物，均可用C18柱和甲醇及缓冲液配制的流动相或用离子对法，分析主体及其收产物的含量。对普鲁卡因酰胺、茶碱等可进行主体含量的测定，对****可测定主体含量及其降解产物，以便保证**的热量。③分析**在体内的残量：这是近来研究新药效能很主要的内容之一，如冬凌草甲素是植物中的一组分，有**效果，但是毒性大。测定其在血清中含量很重要，现在可用C18柱及甲醇水为流动相，测定处理后的血清样品，即可得到血中的含量。如磺胺类药品在血清及尿中含量也不允许太大，可用C18柱及酸性乙醇为流动相，测定含量后，则可估计*合适的用药剂量。又如四环素、***酸、止痛药、退烧药、护糖尿病的**等，在血或尿中的含量都可用C18柱用甲醇、水为流动相来测定含量。因此，反相色谱法应用范

液相色谱仪常见故障处理1、流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法**不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0～3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。2、柱压高原因(1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;(2)样品污染沉积。处理对于**种情况先用40～50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用

1、流动相内有气泡关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法**不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0～3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。2、柱压高原因（1）缓冲液盐分如（乙酸铵等）沉积于柱内;（2）样品污染沉积。处理对于**种情况先用40～50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲

1高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。2常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。其中*常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。2.1柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。压力过高、过低都属于柱压问题。2.1.1压力过高这是高效液相在使用中*常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时，我们应该分段进行检查。(1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检

圣荷赛，加州(2009年7月24日)-全球科学服务领域的***赛默飞世尔科技今天发布了一篇新应用文献，证实了配备二极管阵列检测器(PDA)的超高速液相色谱仪(UHPLC)**测量防晒乳液中UV吸收化合物的**能力。新的应用文献证实，配备PDA检测器的ThermoScientificAccela超高速液相色谱仪的快速HPLC分离能力，仅7分钟内可分辨防晒品中的6个UV吸收成分。该应用文献标题为“利用配备二极管阵列检测器的UHPLC确定防晒品中的UV吸收剂”(DeterminationofUVAbsorbersfromSunscreensbyUHPLCwithPhotodiodeArrayDetection)，可通过http://www.thermo.com/accela进行下载。在美国，几乎半数的癌症为皮肤癌，每年新确诊人数超过了一百万。大部分病例都与暴露在有害的UVB和UVA太阳辐射下有关。防晒乳液将UV吸收化合物分散在油状基质中，基质中可能包括润肤剂、皮肤保湿剂和反光颗粒氧化锌。有一些UV吸收剂，比如4-甲基苯亚甲基樟脑(4-MBC)和奥克立林，可能会成为内分

虽然蒸发光散射检测器(EvaportivelightScattering,ELSD)已经开发生产15年，但是对于许多色谱工作者来说，它仍是一个新产品。**台ELSD是由澳大利亚的UnionCarbide研究实验室的科学家研制开发的，并在八十年代初转化为商品，八十年代以激光为光源的**代ELSD面世。此后，通过不断设计提高了ELSD的操作性能。现在ELSD越来越多的作为通用型检测器]用于高效液相色谱，超临界色谱（SFC）和逆流色谱中。ELSD*大的优越性在于能检测不含发色团的化合物，如：碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂、**，并在没有标准品和化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物。ELSD的通用检测方法消除了常见于传统HPLC检测方法中的难点，不同于紫外和荧光检测器，ELSD的响应不依赖与样品的光学特性，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测，不受其官能团的影响。ELSD的响应值与样品的质量成正比，因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物。示差检测器（RI）也可以说是一种通用型检测器，打它灵敏度低，并与梯度脱洗不相容。质谱是另一种通用型检测器，但它的昂贵操作费用和

本报讯5月25日，安捷伦科技公司在京举行新产品发布会，推出Agilent1290Infinity液相色谱仪，同时宣布****台Agilent1290Infinity落户中科院大连化物所张玉奎院士的实验室。安捷伦科技公司生命科学与化学分析事业部大中国区总经理牟一萍称，Agilent1290Infinity要“终结关于UHPLC（**超高效液相色谱）的争论”。据介绍，该款产品具有业界*宽范围的分析能力，用户可以使用任何类型的填料、任何规格的色谱柱，任何流动相与固定相，并将获得单位时间内*大的分离能力，同时又可以满足在任何厂商的UHPLC和HPLC系统之间的方法转移。牟一萍介绍说，面临金融危机严峻考验的2008财年，安捷伦科技生命科学与化学分析事业部在全球的收入为22亿美元，投资回报率达到28%,比2007财政年度增长了17%。中国是安捷伦在全球的重要战略市场，是该部门实现持续强劲增长势头的关键。（肖洁）

关于UHPLC的争论到此结束安捷伦举行Agilent1290Infinity液相色谱仪新产品发布会暨技术讲座北京，2009年5月25日——全球**的跨国高科技公司安捷伦科技(纽约证券交易所股票代码：A)今天在北京新世纪日航酒店隆重举行Agilent1290Infinity液相色谱仪新产品发布会暨技术讲座，并同时举办媒体见面会，备受广大用户和媒体的关注。安捷伦科技公司生命科学与化学分析事业部大中国区总经理牟一萍女士回顾安捷伦公司2008年度和2009年**季度的强势增长，并向大家介绍了1290Infinity的诞生历程在新产品发布会上，安捷伦科技公司生命科学与化学分析事业部大中华区总经理牟一萍女士向与会媒体和嘉宾分享了安捷伦科技公司在金融危机严峻环境下，积极应对危机影响，优化运行模式，生命科学与化学分析事业部持续关注市场发展，加快推出新产品并不断扩充产品线，始终保持用户满意度和忠诚度业界遥遥**。在2008财年，安捷伦科技生命科学与化学分析事业部在全球的收入为22亿美元，投资回报率达到28%，比2007财政年度增长了17%。中国是安捷伦在全球的重要的战略市场，是该