新闻详情
qPCR 实验Ct 值偏大或普通 PCR 产量低分析
日期：2024-11-22 01:56
浏览次数：616
摘要：
逆转录后的 qPCR 实验 Ct 值偏大或者普通 PCR 产量低。
1、 RNA 模板质量差，需要重新制备 RNA 模板，可通过琼脂糖凝胶电泳检测质量。
2、 逆转录后的 cDNA 中含有高浓度的模板 RNA 和逆转录试剂成分，可能会对后续的PCR 产生抑制作用，所以可以适当梯度提高 cDNA 稀释比例（通常来说可将 cDNA 原液稀释5-10倍，其zui 佳模板加入量以扩增得到的 Ct 值在20-30个循环为好）。
3、 起始的 RNA 模板量低，需要减少稀释倍数或增加 RNA 模板量。
4、 基因本身原因（复杂和长度），可以重新设计复杂基因...
逆转录后的 qPCR 实验 Ct 值偏大或者普通 PCR 产量低。
1、 RNA 模板质量差，需要重新制备 RNA 模板，可通过琼脂糖凝胶电泳检测质量。
2、 逆转录后的 cDNA 中含有高浓度的模板 RNA 和逆转录试剂成分，可能会对后续的PCR 产生抑制作用，所以可以适当梯度提高 cDNA 稀释比例（通常来说可将 cDNA 原液稀释5-10倍，其zui 佳模板加入量以扩增得到的 Ct 值在20-30个循环为好）。
3、 起始的 RNA 模板量低，需要减少稀释倍数或增加 RNA 模板量。
4、 基因本身原因（复杂和长度），可以重新设计复杂基因的引物，避免复杂结构。或者用三步法程序或延长两步法程序的延伸时间。
5、 逆转录或者定量产品性能差，可以通过做平行不用品牌产品对比实验，对比逆转录产品性能。