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细胞稳转株构建病毒法步骤
细胞稳转株构建病毒法步骤：1、确定目标细胞系的相关信息，细胞的培养条件，细胞的增值速度，支原体污染情况；2、预实验确定MOI值，可通过查阅文献确定慢病毒在目标细胞系中的MOI值也可参考查阅得到的数据，设计梯度实验，摸索合适MOI；3、预实验确定筛选**用量，常用的**筛选有：puro、G418、潮霉素等；4、细胞铺板，将需要的细胞量接种于合适的培养皿中；5、细胞感染，通过接种的细胞量及预实验得来的
发布时间：2024-07-16 16:27
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ELISA试剂盒鉴定方法详述
鉴别方法：Ⅰ：利用干扰实验即可辨别elisa试剂盒是否检测目的抗原，方法如下：1、将针对试剂盒特异性的重组蛋白抗原和试剂盒中的检测抗体配置成antibody:antigen≈1:2的混合孵育液。2、37℃孵育15分钟后，代替原试剂盒中的检测抗体3、后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物4、实验完毕后，检测其标准曲线，如果标准曲线良好则说明加入的目的抗原和试剂盒抗体不匹配，试剂盒检
发布时间：2024-07-10 14:29
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ELISA实验显色淡结果分析
ELISA（酶联**吸附试验）是一种用于检测抗原或抗体浓度的**学试验。如果ELISA实验的显色淡或灵敏度低，可能有多种原因。ELISA实验显色淡的原因及解决方案： 原因一：试剂盒在运输途中时间太长，温度太高。 解决方案：尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温。 原因二：试剂盒未充分平衡。 解决方案：试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃
发布时间：2024-06-24 16:00
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血清的保存注意事项
血清的保存注意事项：1、需要长期保存的血清必须储存于-20℃-70℃低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂.2、热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,
发布时间：2024-06-17 11:10
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胎牛血清挑选标准
胎牛血清挑选标准:1.看产地不同产地的胎牛血清，品质也是相差甚远。值得注意的是，胎牛血清是动物源生物制品，我国对于动物源制品的进口一直有很严格的规定，目前我国批准进口的胎牛血清来源是澳大利亚、新西兰和乌拉圭（划重点！），合法正规途径进口的胎牛血清必须在产品包装上标注血源地。这意味着，其他血源地的胎牛血清在我国是不允许进口的，在选购进口产品时，要规避选取来源为禁止输入国家的相关产品。 2.看资质合法
发布时间：2024-06-03 14:37
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细胞复苏与冻存
1、细胞复苏：①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间min左右，加入4-5ml培养基混匀。②在000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。2、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种1、弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗-2次，加入mL0.25%（T25瓶）2、-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，
发布时间：2024-05-23 11:38
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细胞冻存原理
当细胞所处温度低于0°C时，细胞脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶，冰晶的大小对细胞的影响是不同的，大冰晶容易造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂，故造成复苏出来的细胞存活率、状态等与冻存前的状态相差甚远。因此，我们在冻存细胞的时候会采取两个措施，一加入低温保护剂，二慢冻细胞。冻存时机：细胞应在生长良好、密度约为80-90％、数目一般为106-107/ml，活力差的细胞在冻存后的成活率很
发布时间：2024-05-14 16:10
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抗体稳定性良好理由小结
抗体稳定性良好理由小结：1.抗体的稳定性是自然界长期进化的结果抗体是**系统中重要的分子之一，其稳定性是自然进化筛选的结果。在众多物种中，抗体分子形成了保守而稳定的结构，分子中70%氨基酸残基(**球蛋白结构域)以bet**层(beta-sheet)形式堆叠，形成紧密并能耐受蛋白酶作用的“三明治”结构，轻链和重链通过保守的二硫键形成具有三个结构域的**球蛋白，大大提高了分子本身的稳定性。2.抗体浓
发布时间：2024-05-09 10:17
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Elisa测定实操要点总汇
Elisa方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定.在Elisa测定中影响因素较多,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果。1．样品稀释一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定,以保证试验的灵敏度和特异性.酶联**反应是一种敏感性很高的反应,如果血清不稀释,不可避免会产生很强的非特异性反应,出现假阳性.2．试剂盒平衡Elisa中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃),一般需在室温放
发布时间：2024-04-26 10:26
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基础培养基组成及作用
基础培养基组成及作用：氨基酸：组成蛋白质的基本单位。不同的细胞对氨基酸的需求各异，但几种必需氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，如组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、酪氨酸等。其余非必需氨基酸，细胞可以自己合成，或通过转氨作用由其他物质转化而来。绝大部分细胞对谷氨酰胺有较高的要求，因为谷氨酰胺是作为能源及碳源物质同时被细胞利用，是是细胞合成
发布时间：2024-04-17 16:13
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小鼠ELISA试剂盒双抗体夹心法流程
小鼠ELISA试剂盒双抗体夹心法流程:1、用缓冲液将抗体稀释至1-1a0ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。3、
发布时间：2024-04-11 11:16
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细胞衰老检测方法与步骤
细胞衰老检测方法与步骤：（1）细胞接种前在6孔培养板中预先放置**的细胞片，每孔加入1×10E5个细胞，37℃5%CO2条件下培养过夜，使细胞在细胞片上生长。（2）在超净工作台中吸弃6孔培养板中的培养液，加入×1PBS，洗涤细胞1次，随后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，室温条件下固定3~5分钟。（3）吸弃2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，加入×1PBS，洗涤细胞3次，每次3分钟。（4）吸弃×1P
发布时间：2024-04-02 14:30
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PCR反应温度循环参数
PCR反应温度循环参数：1．变性温度与时间PCR反应中模板DNA的变性十分重要。只有完全性的模板DNA和PCR产物双链完全解开，才能有效的和引物结合。这种结合是PCR扩增的基础。变性温度越高，时间越长变性就越充分。但温度过高、时间过长又会影响TaqDNA聚合酶的活性，所以通常选用变性温度为95℃30s为宜。在PCR反应中第2个循环变性重要，需时间较长，因模板DNA的链比较长。2．复性温度与时间变性
发布时间：2024-03-29 16:46
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HRP底物氯萘酚操作步骤
氯萘酚可以形成一种蓝黑色产物。敏感性低于DAB，且产物可溶于醇中。它适用于当DAB反应形成较高背景或要求改变产物的颜色。1、需要的溶液和特殊设备0.03％氯萘酚，用无水乙醇溶解(贮存在-20℃)，0.05mol／LTris(pH7.6)，过氧化氢，Gelvatol或者Mowiol，光学显微镜(通常带有照相机以便于记录结果)。2、操作步骤(1)氯萘酚贮存液的准备：用10mL无水乙醇溶解0.3g氯萘酚
发布时间：2024-03-21 09:59
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细胞培养过程温馨提示
细胞培养过程温馨提示：1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。2.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。3.用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形
发布时间：2024-03-12 10:54
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