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PCR反应的主要物质解说
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+详细解说：1.引物引物是PCR特异性反应的关键，PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。2.酶及其浓度目前有两种TaqDNA聚合酶，一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化
发布时间：2024-11-18 10:37
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大鼠ELISA检测试剂盒试验血清解冻过程
大鼠ELISA检测试剂盒试验血清解冻过程：1、请勿将血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。2、按照所建议的逐步解冻法(-2O℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，实验显示非常容易产生沉淀物。3、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。4、随时将之摇晃均匀，使温度
发布时间：2024-11-11 16:08
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PCR反应内参基因的三大作用
PCR反应内参基因的三大作用：1.样品提取质量的判断标准在PCR实验中，内参基因首先作为判断样品提取是否成功的标准。当使用逆转录得到的cDNA进行PCR实验时，如果结果为阴性，不能直接得出样品中没有目的基因的结论。只有当内参基因的CT值处于一个合理的范围内，例如20左右，我们才能确信样品制备没有问题，从而确保实验结果的可靠性。2.目的基因表达量的计算基础在进行相对定量PCR时，内参基因是计算目的基
发布时间：2024-10-29 11:04
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普通pcr引物设计和荧光定量pcr引物设计差异
普通pcr引物设计和荧光定量pcr引物设计的区别一、方法不同1、普通pcr引物设计：引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。2、荧光定量pcr引物设计：通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，标记跟踪PCR产物进行实时监测反应，利用与之相适应的软件对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度二、原理不同1、普通pcr引物设计：为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。2、荧光定
发布时间：2024-10-25 13:53
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ELISA实验操控的仪器操作技能
为了使终究的ELISA试剂盒实验效果就要较高的可靠性，应在实验开端前有必要好的前期准备作业包括对实验所需的仪器进行质控。使仪器坚持作业状况，应建立维护和校对仪器的标准操作程序，常见需求操控的仪器包括：移液器（加样枪）、温箱、洗板机和酶标仪。具体质控操作技能整理的如下要求： 1、洗板机：每个设置洗板后的残留液有各自的规矩，一般不逾越2μl；人工扣板时，垫纸不湿；守时检查管孔是否阻塞。2、酶标仪：常常
发布时间：2024-10-21 10:58
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ELISA实验各项条件的选择
在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:1、固相载体的选择:许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。2、包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相
发布时间：2024-10-14 16:43
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抗体验证的八种方法介绍
抗体验证的八种方法：1.省略一抗这是测试由二级试剂引起的潜在背景的有用且重要的控制。然而，这个实验没有提供关于一抗质量的信息。2.抗体信号与文献数据一致WB中观察到的分子量、组织分布和染色模式与文献一致。这种验证方法很容易执行，但也有一些限制；例如，WB中条带的正确分子量并不一定会告诉您该条带是所需的目标蛋白质。在WB中很容易有数百种蛋白
发布时间：2024-10-09 13:55
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ELISA试剂盒检测未知抗原的双抗体夹心法过程
这种形式需要使用特定于该抗原不同表位的两种不同抗体。这两种抗体通常被称为匹配抗体对。其中一种抗体包被于多孔板表面上并用作捕获抗体以促进抗原的固定，另一种抗体被酶偶联并促进抗原的检测。ELISA试剂盒检测未知抗原的双抗体夹心法过程：1、包被：用包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/mL。向每个Elisa板孔中加入0.1mL，4℃过夜孵育。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3
发布时间：2024-10-05 13:43
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PCR反应扩增产物出现多条带分析
扩增产物出现多条带（1）引物用量偏大，引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。（2）循环的次数过多。适当增加模板的量，减少循环次数。（3）酶的用量偏高或酶的质量不好，应降低酶量或调换另一来源的酶。（4）退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。应提高退火温度，减少变性与延伸时间，也可采用二种温度的PCR扩增。（5）样品处理不当。（6）Mg2+浓度偏高，因适当调整Mg2+使用浓度。（7）若为PCR试
发布时间：2024-09-27 14:19
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影响抗原抗体反应的两大因素
抗原与抗体发生特异性结合后，虽由亲水胶体变为疏水胶体，若溶液中无电解质参加，仍不出现可见反应。为了促使沉淀物或凝集物的形成，常用0.85％氯化钠或各种缓冲液作为抗原及抗体的稀释液。由于氯化钠在水溶液中解离成Na+和C1－，可分别中和胶体粒子上的电荷，使胶体粒子的电势下降。当电势降至临界电势（12～15mV）以下时，则能促使抗原抗体复合物从溶液中析出，形成可见的沉淀物或凝集物。一、温度在一定范围内，
发布时间：2024-09-18 15:15
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PCR反应主要成份Taq DNA聚合酶分析
一般TaqDNA聚合酶活性半衰期为92.5℃130min，95℃40min，97℃5min。现在人们又发现许多新的耐热的DNA聚合酶，这些酶的活性在高温下活性可维持更长时间。TaqDNA聚合酶的酶活性单位定义为74℃下，30min，掺入10nmol/LdNTP到核酸中所需的酶量。TaqDNA聚合酶的一个致命弱点是它的出错率，一般PCR中出错率为2×10-4核苷酸/每轮循环，在利用PCR克隆和进行序
发布时间：2024-08-29 16:53
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RT-LAMP检测试剂盒试验使用方法
RT-LAMP检测试剂盒试验使用方法:一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。2.用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。3.在7号管中加入5μL阳性对照（浓度为1×10E8拷贝/
发布时间：2024-08-15 15:34
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防血清挥发的方法
防发挥的方法 1、使用前：必须灭活处理，56℃30分钟。对于一些品质高的胎牛血清和新牛血清可以考虑不经灭活直接用于细胞培养。 2、储存条件：一般储存于－20℃，同时应避免反复冻融。购买大包装的血清后，首先要灭活处理，然后分装成小包装，储存于－20℃，使用前融化。融化时现置于4℃。融化后的血清在4℃不宜长时间存放，应尽快使用。 3、使用浓度：自从有了合成培养基，血清就是作为一种添加成分与合成培
发布时间：2024-08-08 10:21
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小鼠8异前列腺素ELISA试剂盒操作步骤
操作步骤:1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。4.
发布时间：2024-07-24 09:58
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细胞稳转株构建病毒法步骤
细胞稳转株构建病毒法步骤：1、确定目标细胞系的相关信息，细胞的培养条件，细胞的增值速度，支原体污染情况；2、预实验确定MOI值，可通过查阅文献确定慢病毒在目标细胞系中的MOI值也可参考查阅得到的数据，设计梯度实验，摸索合适MOI；3、预实验确定筛选**用量，常用的**筛选有：puro、G418、潮霉素等；4、细胞铺板，将需要的细胞量接种于合适的培养皿中；5、细胞感染，通过接种的细胞量及预实验得来的
发布时间：2024-07-16 16:27
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