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WB封闭液的选用要求
日期：2024-11-22 00:48
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摘要：
封闭是Western Blot 至关重要的一部分， 所以正确的封闭液选择可以让抗体更特异地和抗原结合，为成功的WB奠定基础。封闭液的选用要求：
1、常用封闭液为脱脂牛奶（光明或伊利等）、牛血清白蛋白（BSA）、无蛋白封闭液等。
2、封闭液浓度：封闭时一般用5%脱脂牛奶，也可用1-5%BSA或1%无蛋白封闭液；配制二抗稀释液一般为1-5%脱脂牛奶，全部用PBS稀释。
3、封闭时间：室温1-2h、4度过夜或37度半小时。
4、封闭液pH：一般5%脱脂牛奶pH大约为6.0-6.5左右，而1%脱脂牛奶可能6.5-7，好像RD公司的W...
封闭是Western Blot 至关重要的一部分， 所以正确的封闭液选择可以让抗体更特异地和抗原结合，为成功的WB奠定基础。封闭液的选用要求：
1、常用封闭液为脱脂牛奶（光明或伊利等）、牛血清白蛋白（BSA）、无蛋白封闭液等。
2、封闭液浓度：封闭时一般用5%脱脂牛奶，也可用1-5%BSA或1%无蛋白封闭液；配制二抗稀释液一般为1-5%脱脂牛奶，全部用PBS稀释。
3、封闭时间：室温1-2h、4度过夜或37度半小时。
4、封闭液pH：一般5%脱脂牛奶pH大约为6.0-6.5左右，而1%脱脂牛奶可能6.5-7，好像RD公司的WB-Protocol中要求封闭液和稀释抗体的封闭液需要调pH至7.4；但是大多数抗体不调pH也可以做出来。
5、个人经验：5%脱脂牛奶封闭效果佳，但有时也可能封闭过度，可以与BSA或无蛋白封闭液轮流更换。