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PCR定量试剂盒的注意事项介绍
日期：2024-11-22 13:19
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摘要：
PCR定量试剂盒的注意事项
由于本品检测灵敏度极高，即使空气中微量的DNA气溶胶都可以引起污染，进而导致实验失败。因此反应体系配制时请于超净工作台内进行，配制过程中请使用干净**枪头、反应管，条件容许的实验室推荐使用专用的移液枪，避免交叉污染;
由于本品中含有荧光染料SYBRGreen I，因此无论保存还是配置反应体系时都应该尽量避免强光照射;
本产品中不含用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差的Rox ReferenceDye，客户可根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX内参染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差;
建议在冰上配制PCR反应液，再放入PCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性，减少背景;
模板DNA：用本产品，cDNA、基因组DNA、质粒DNA、病毒DNA等都可作为模板。在添加DNA模板时请注意模板量对PCR扩增的影响。本产品建议添加量为：
cDNA添加量不应超过总反应体系的10%；基因组DNA为模板时，为避免在高浓度区域出现线性差的情况，请注意添加量小于500ng；病毒DNA也可作为PCR模板，添加时请以300ng为上限；由于质粒DNA浓度和拷贝数很高，在添加PCR模板之前*好进行稀释梯度试验，以便确定合适的质粒DNA拷贝数。
由于本品检测灵敏度极高，即使空气中微量的DNA气溶胶都可以引起污染，进而导致实验失败。因此反应体系配制时请于超净工作台内进行，配制过程中请使用干净**枪头、反应管，条件容许的实验室推荐使用专用的移液枪，避免交叉污染;
由于本品中含有荧光染料SYBRGreen I，因此无论保存还是配置反应体系时都应该尽量避免强光照射;
本产品中不含用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差的Rox ReferenceDye，客户可根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX内参染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差;
建议在冰上配制PCR反应液，再放入PCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性，减少背景;
模板DNA：用本产品，cDNA、基因组DNA、质粒DNA、病毒DNA等都可作为模板。在添加DNA模板时请注意模板量对PCR扩增的影响。本产品建议添加量为：
cDNA添加量不应超过总反应体系的10%；基因组DNA为模板时，为避免在高浓度区域出现线性差的情况，请注意添加量小于500ng；病毒DNA也可作为PCR模板，添加时请以300ng为上限；由于质粒DNA浓度和拷贝数很高，在添加PCR模板之前*好进行稀释梯度试验，以便确定合适的质粒DNA拷贝数。
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