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了解大肠杆菌表达系统的组成
日期：2024-10-02 12:11
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摘要：
大肠杆菌表达系统的组成：表达载体、外源基因、表达宿主菌。
一、表达载体：
一个完整的质粒载体需要有：复制起点、启动子、插入的目的基因、筛选标记以及终止子。
二、外源基因：
在大肠杆菌表达体系中要表达的基因即外源基因，包括原核基因和真核基因。原核基因可以在大肠杆菌中直接表达，但是真核基因含有内含子，大肠杆菌不能对mRNA进行剪切，从而真核基因一般以cDNA的形式在大肠杆菌表达系统中表达。目的蛋白在大肠杆菌系统表达中的形式有二种。一种是在细胞内...
大肠杆菌表达系统的组成：表达载体、外源基因、表达宿主菌。
一、表达载体：
一个完整的质粒载体需要有：复制起点、启动子、插入的目的基因、筛选标记以及终止子。
二、外源基因：
在大肠杆菌表达体系中要表达的基因即外源基因，包括原核基因和真核基因。原核基因可以在大肠杆菌中直接表达，但是真核基因含有内含子，大肠杆菌不能对mRNA进行剪切，从而真核基因一般以cDNA的形式在大肠杆菌表达系统中表达。目的蛋白在大肠杆菌系统表达中的形式有二种。一种是在细胞内表现为不溶性的包涵体颗粒。另一种是在细胞内表现为可溶性的蛋白质。可溶性的目标蛋白质除可存在于细胞质中外，还可借助于本身的功能序列和大肠杆菌蛋白质加工、运输体系，*终分泌到周质空间，或外泌到培养液中。
图2：外源基因在大肠杆菌中高效表达的原理
三、宿主细胞：
大肠杆菌蛋白表达过程中很重要的因素就是宿主细胞的选择。对于宿主细胞的选择主要根据宿主细胞各自的特征及目的蛋白的特性。对于是适合目的基因表达的宿主细胞主要有以下要求：①容易获得较高浓度的细胞 ②能利用易得廉价原料 ③不致病、不产生内毒su ④发热量低、需氧低、适当的发酵温度和细胞形态 ⑤容易进行代谢调控 ⑥容易进行DNA重组技术操作 ⑦产物的产量、产率高 ⑧ 产物容易提取纯化。