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PCR引物设计的一般原则是什么？
日期：2024-11-22 06:25
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摘要：
PCR引物设计的一般原则是什么？
1、引物长度：15-30bp,一般为20bp左右。
2、引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。上下游引物的GC含量不能相差太大。A/T/C/G*好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
3、引物结构：避免引物3’端出现互补序列及二级结构，3’端的碱基特别是*末及倒数第2个碱基，应严格要求配对。
4、引物中酶切位点一般加在5’端，合适的酶切位点便于后续实验中的酶切分析或分子克隆。
5、引物浓度：每条引物浓度0....
PCR引物设计的一般原则是什么？
1、引物长度：15-30bp,一般为20bp左右。
2、引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。上下游引物的GC含量不能相差太大。A/T/C/G*好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
3、引物结构：避免引物3’端出现互补序列及二级结构，3’端的碱基特别是*末及倒数第2个碱基，应严格要求配对。
4、引物中酶切位点一般加在5’端，合适的酶切位点便于后续实验中的酶切分析或分子克隆。
5、引物浓度：每条引物浓度0.1-1umol或10-100pmol，以*低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物间二聚体的形成机会。