影响PCR特异性的因素分析

日期：2024-11-03 23:35

浏览次数：520

摘要：有许多因素可以影响PCR的特异性，在此我们作一归纳，供大家参考： 1、退火步骤的严格性：提高退火温度可以减少不匹配的杂交，从而提高特异性。 2、减短退火时间及延伸时间可以减少错误引发及错误延伸。 3、引物二聚体是常见的副产品，降低引物及酶的浓度也可以减少错误引发，尤其是引物的二聚化。 4、改变MgCl2(有时KCl)浓度可以改进特异性，这可能是提高反应严格性或者对Taq酶的直接作用。 5、模板中如果存在次级结构，例如待扩增的片段易自行形成发夹结构时，可在PCR混合物中的4×dNTPs中加...

有许多因素可以影响PCR的特异性，在此我们作一归纳，供大家参考：

1、退火步骤的严格性：提高退火温度可以减少不匹配的杂交，从而提高特异性。

2、减短退火时间及延伸时间可以减少错误引发及错误延伸。

3、引物二聚体是常见的副产品，降低引物及酶的浓度也可以减少错误引发，尤其是引物的二聚化。

4、改变MgCl2(有时KCl)浓度可以改进特异性，这可能是提高反应严格性或者对Taq酶的直接作用。

5、模板中如果存在次级结构，例如待扩增的片段易自行形成发夹结构时，可在PCR混合物中的4×dNTPs中加入7-脱氮-2’-脱氧鸟苷-5’-三磷酸（7-deaza-2’-deoxyguanosine-5’-trihosphate）(de7GTP)。用de7GTP与dGTP比例为3：1的混合物（150μmol/l de7GTP +50μmol/L dGTP）代替200μmol/l dGTP，则可阻非特异性产物的**。