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PCR技术RNA提取流程
日期：2024-11-22 01:22
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摘要：
RNA的提取是参照全式金生物的Transzol up提取试剂盒完成的。
1、离心机4℃预冷，准备试剂：氯仿、异内醇、75%乙醇（用DEPC水配制）、无RNase的水或DEPC水、无酶吸头及试管，戴口罩、帽子、无粉乳胶手套；
2、取出转染建模成功24h后的细胞，吸弃培养液，用1×PBS清洗1次；
3、每10cm2生长的细胞加入1mL的Transzol Up, 放置片刻后使用移液枪吹打细胞使其完全脱落；
4、用移液枪反复吹吸裂解液直至无明显沉淀，将裂解液全部转移至标记好的1.5mL EP管中，室温静置5min；
5、往每个EP管中加0.2mL氯...
RNA的提取是参照全式金生物的Transzol up提取试剂盒完成的。
1、离心机4℃预冷，准备试剂：氯仿、异内醇、75%乙醇（用DEPC水配制）、无RNase的水或DEPC水、无酶吸头及试管，戴口罩、帽子、无粉乳胶手套；
2、取出转染建模成功24h后的细胞，吸弃培养液，用1×PBS清洗1次；
3、每10cm2生长的细胞加入1mL的Transzol Up, 放置片刻后使用移液枪吹打细胞使其完全脱落；
4、用移液枪反复吹吸裂解液直至无明显沉淀，将裂解液全部转移至标记好的1.5mL EP管中，室温静置5min；
5、往每个EP管中加0.2mL氯仿（Transzol Up体积的1/5），混匀振荡30s，室温静置3min；
6、4℃条件下10000g离心15min，离心后RNA主要分布在上层水相中，体积约50%；
7、转移上层水相于新的EP管中（约400μL，注意不要吸取到下层），每管加入0.5mL异丙醇 （Transzol Up体积的1/2），颠倒混匀，室温孵育10min；
8、4℃下10000g离心10min后在管侧和管底形成胶状沉淀，吸弃上清，加1mL 75%乙醇吹悬沉淀；
9、4℃下7500g离心5min后弃上清，尽量吸净，室温晾干沉淀5min，依细胞量加入30~100μL的RNA溶解液；
10、55℃~60℃金属浴10min，-80℃冰箱保存备用。