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PCR技术RNA提取流程
日期:2024-08-24 20:37
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摘要:
RNA的提取是参照全式金生物的Transzol up提取试剂盒完成的。
1、离心机4℃预冷,准备试剂:氯仿、异内醇、75%乙醇(用DEPC水配制)、无RNase的水或DEPC水、无酶吸头及试管,戴口罩、帽子、无粉乳胶手套;
2、取出转染建模成功24h后的细胞,吸弃培养液,用1×PBS清洗1次;
3、每10cm2生长的细胞加入1mL的Transzol Up, 放置片刻后使用移液枪吹打细胞使其完全脱落;
4、用移液枪反复吹吸裂解液直至无明显沉淀,将裂解液全部转移至标记好的1.5mL EP管中,室温静置5min;
5、往每个EP管中加0.2mL氯...
RNA的提取是参照全式金生物的Transzol up提取试剂盒完成的。
1、离心机4℃预冷,准备试剂:氯仿、异内醇、75%乙醇(用DEPC水配制)、无RNase的水或DEPC水、无酶吸头及试管,戴口罩、帽子、无粉乳胶手套;
2、取出转染建模成功24h后的细胞,吸弃培养液,用1×PBS清洗1次;
3、每10cm2生长的细胞加入1mL的Transzol Up, 放置片刻后使用移液枪吹打细胞使其完全脱落;
4、用移液枪反复吹吸裂解液直至无明显沉淀,将裂解液全部转移至标记好的1.5mL EP管中,室温静置5min;
5、往每个EP管中加0.2mL氯仿(Transzol Up体积的1/5),混匀振荡30s,室温静置3min;
6、4℃条件下10000g离心15min,离心后RNA主要分布在上层水相中,体积约50%;
7、转移上层水相于新的EP管中(约400μL,注意不要吸取到下层),每管加入0.5mL异丙醇 (Transzol Up体积的1/2),颠倒混匀,室温孵育10min;
8、4℃下10000g离心10min后在管侧和管底形成胶状沉淀,吸弃上清,加1mL 75%乙醇吹悬沉淀;
9、4℃下7500g离心5min后弃上清,尽量吸净,室温晾干沉淀5min,依细胞量加入30~100μL的RNA溶解液;
10、55℃~60℃金属浴10min,-80℃冰箱保存备用。