操作流程：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
我司主营产品之一，产品皆严格按照相关标准进行生产，并经过了严格地反复地检测，我们以严谨的态度保证产品的质量，从而保证您的实验顺利进行。产品供货周期短，供货及时，且我司还提供完整的售前和售后服务。本公司产品仅用于科研。
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产品名称 |
人12-羟基二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA Kit |
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英文名称 |
Human 12-Hydroxyeicosatetraenoic Acid(12-HETE)ELISA Kit |
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货号 |
PH103666 |
试剂配制:
1、酶联板assay plate ：一块96孔或者48孔。
2、标准品standard：2瓶冻干品。
3、样品稀释液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根过氧化物酶标记亲和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液wash buffer：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。
试剂准备：
1. 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC)，试剂不能直接在37oC溶解。
2. 标准品(冻干品)：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入150μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成不同的梯度， 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
3. 浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30倍稀释。
样本实验前准备：
ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
（1）血清
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（2）血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（3）尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
（4）细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
（5）培养细胞
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（6）组织标本
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
注意事项：
1. 试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。
2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱，已复溶但未用完的标准品，请丢弃。
3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30 min，且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。
4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测，且加入试剂的顺序应保持一致。
5. 为避免交叉污染，请在试验中使用 1 次性试管，枪头，封板膜及洁净塑料容器。
6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少，在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶盖上，使用前请离心处理（5-10 S 即可），使管壁上的液体集中在管底部，取用时，请用移液器小心吹打几次。
7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外，请不要使用其他来源试剂盒内含的试剂代替本试剂盒中的某单个组分。
8. 为保证结果准确，每次检测均需做标准曲线。
壬醛0.98 250mg
矮壮素0.999 250mg
1,2-二溴0.987 250mg
阿斯巴甜(甜味素)0.997 250mg
盐酸氯丙嗪(含干冰运输费)0.991 250mg
磺胺酰-甲酰磺胺0.998 250mg
亚乙基0.999 250mg
0.999 250mg
二甲硝0.999 250mg
盐酸0.999 200mg
六氯-1,3-0.98 250mg泛素化组蛋白H2AX抗体
葡萄糖神经酰胺合成酶抗体
肿瘤抑制基因UVRAG抗体
泛素蛋白连接酶E3α2抗体
去泛素化酶3抗体
突触囊泡融合蛋白Unc18-3抗体
FUT3抗体
14号染色体开放阅读框130抗体
泛素激活酶E1抗体
碱性成纤维细胞生长因子受体1抗体
泛素特异性蛋白酶9X抗体
泛素融合降解样蛋白1抗体
去泛素酶10抗体
人12-羟基二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA KitIGSF21 球蛋白超家族成员21抗体 0.2ml
生长停滞特异性蛋白6(GAS6)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISA Kit for Growth Arrest Specific Protein 6 (GAS6) 规格：48T/96T 进口、国产
LRCH4 富含亮氨酸重复家庭蛋白4抗体 0.2ml
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand (TRAIL) 规格：48T/96T 进口、国产
KCND2/Kv4.2 电压门控性钾通道蛋白Kv4.2抗体 0.2ml
牙本质涎磷蛋白(DSPP)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISA Kit for Dentin Sialophosphoprotein (DSPP) 规格：48T/96T 进口、国产
BEND2/CXorf56 BEND2蛋白抗体 0.2ml
成纤维细胞生长因子21(FGF21)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 21 (FGF21) 规格：48T/96T 进口、国产
EGFL8 表皮生长因子样蛋白8抗体 0.2ml
视黄醇结合蛋白4(RBP4)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISA Kit for Retil Binding Protein 4, Plasma (RBP4) 规格：48T/96T 进口、国产
C10orf62 10号染色体开放阅读框62抗体 0.2ml
生长分化因子5(GDF5)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISA Kit for Growth Differentiation Factor 5 (GDF5) 规格：48T/96T 进口、国产
