细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代。
英文简称
规格
货号
DT40
1×106
P-X10429
产品详情：
细胞别称；DT-40; DT 40; DT40B; LSCC-DT40；鸡瘤细胞
种属来源；鸡
组织来源；法氏囊，瘤
生长特性；悬浮生长
细胞形态；母细胞样
细胞代数；10代以内
背景介绍；DT40是来自Hyline SC鸡法氏囊细胞株经鸟类白血病病毒诱导建株的。原始瘤用罗氏相关病毒1(RAV-1)感染出生１天的小鸡得到。法氏囊中**的肿瘤制成细胞悬液后通过静脉注射输入同基因型的受体小鸡。经过一次体内移植后，建立了DT40细胞株。 这株细胞包含的前病毒基因整合在c-myc原癌基因的上游，表达的c-myc RNA水平较高。它缺少一个正常c-myc基因，但含有两个拷贝ALV去调控的myc基因。这株细胞保留了重排球蛋白轻链基因(IgL)的能力。在IgL位点，DT40包含一个重排和一个胚系同源基因。c-rel基因和v-rel癌基因在DT40细胞株中都能诱导组织相容性(MHC)II类抗原表达。v-rel 诱导的MHCII表达比c-rel诱导快，且其有效性在数周后达到c-rel的50倍。这株细胞呈母细胞表型。传染性检测表明DT40释放低水平的传染性RAV-1。这株细胞可以用于稳转研究。
生物等级；1
细胞规格；1x106cells/T25或1mL冻存管
支原体检测；无
保藏机构；ATCC; CRL-2111 DSMZ; ACC-636
培养基；90%DMEM+10% FBS
培养条件；气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
冻存条件；无血清冻存液，液氮储存
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1）准备DMEM培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理：
公司正在出售的产品：
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小鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)elisa生化检测试剂盒 |
线粒体绿色荧光染色试剂盒BBcellProbe M18100T |
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10×MOPS缓冲液 500ml |
鱼白介素4(IL-4)elisa生化检测试剂盒 |
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载玻片细胞RHO 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 |
糖蛋白磷脂酶D抗体 |
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马过氧化氢酶(CAT)elisa生化检测试剂盒 |
NKG2A |
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IL-4 ELISA Kit |
NK细胞受体2A抗体 |
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人别孕烯醇酮/3α,5α-四氢孕酮(AP/3α,5α-THP)elisa生化检测试剂盒 |
大鼠褪黑素（MT）elisa检测试剂盒 |
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5α-THPELISAkit |
植物乙醇酸氧化酶（glycolate oxidase）活性比色法定量检测试剂盒 |
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脂肪酸合成酶（FAS）测试盒 |
GPLD1 |
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碱性磷酸酶（AP）标记的兔抗犬IgM抗体 |
四聚体多肽蛋白21B抗体 Anti-TTC21B |
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Rabbit Anti-Dog IgM / AP |
磷酸化突触后密度蛋白95抗体 Anti-Phospho-PSD95 (Tyr236/Tyr240) |
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FAM59A蛋白抗体 |
多胺调制因子结合蛋白1抗体 Anti-PMFBP1 |
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FAM59A |
突触相关蛋白102抗体 Anti-SAP102/MPP3/DLG3 |
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人E3泛素蛋白连接酶TRIM68(TRIM68)抗体elisa生化检测试剂盒 |
小鼠葡萄糖激酶(GCK)elisa生化检测试剂盒 |
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HumanTRIM68antibodyELISAkit |
DT40GCKELISAkit |
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大鼠艾杜糖硫酸酯酶(IDS)elisa生化检测试剂盒 |
人环加氧酶2(COX-2)elisa生化检测试剂盒 |
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IDS ELISA Kit |
COX-2ELISAKit |
实验步骤：
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上，利用293T细胞进行慢病毒包装，获得含目的基因的慢病毒；
2 转染前24 h进行细胞铺板，转染时细胞密度控制在80%左右；
3 天加入适量病毒悬液感染细胞，并置于37 ℃，5% CO2培养箱中孵育；
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基，并继续培养；
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养，直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%，获得稳转细胞系。
