表皮生长因子受体底物8抗体上海博湖生物科技有限公司

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产品名称：表皮生长因子受体底物8抗体
产品型号：BH-K013476
产品**：派瑞曼
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简单介绍：

表皮生长因子受体底物8抗体在抗原刺激下产生的，体液性抗体由B细胞系产生。根据其化学结构和抗原的不同可分为IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5种类型.目前对球蛋白G、A、M、E了解较多，对D的功能了解较少。

详情介绍：

抗体反应特点：

1.高度特异性，特异性是抗原抗体反应的主要特征，特定抗原决定簇只与特定抗体结合；

2.可逆性:抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡, 其反应式为：Ag+AbAg·Ab；

3.适当浓度和比例；

4.敏感性:在测定血清中某一物质的含量时，化学比色法的敏感度为mg/ml水平，酶反应测定法的敏感度约为5~10μg/ml，定中凝胶扩散法的敏感度与酶反应法相仿。

抗体反应的因素：

1.电解质：抗原抗体特异结合后，胶体粒便可发生脱水作用，此时易受电解质影响，如有适当浓度的电解质存在就会使它们失去部分负电荷而相互凝聚，于是出现明显的凝集或沉淀现象。

2.酸碱度:合适的pH为6-8。

3.温度:37℃通常是抗原体反应温度。

别名 Epidermal growth factor receptor kinase substrate 8; Epidermal growth factor receptor pathway substrate 8 ; EPS 8; EPS-8.
英文名称 Anti-EPS8

中文名称 表皮生长因子受体底物8抗体

浓度 1mg/1ml

规格 1mg/1ml

抗体来源 Rabbit

克隆类型 polyclonal

交叉反应 Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Guinea Pig

产品类型一抗

研究领域肿瘤 **学生长因子和** 转录调节因子

蛋白分子量 predicted molecular weight: 92kDa

性状 Lyophilized or Liquid

免疫原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human EPS8 N-terminus

亚型 IgG

本公司产品仅用于科研实验。

抗体的荧光标记法：

（一）基本原理

赖氨酸残基的游离e-氨基可与FITC(其激发波长为492nm,发射光波长为525nm)共价结合。与FITC结合的抗体可用为特异性的探针,以测定细胞相应抗原的存在。FITC具有很高的量子产量(发射光与吸收光的比值,0.85)形成的偶联物的稳定性很好。

（二）仪器和试剂

1.待偶联抗体；

2.碳酸氢钠缓冲液；

3.叠氮钠；

4.庵氰酸荧光素；

5.电磁搅拌器。

实验步骤：

1、石蜡切片，常规脱蜡至水

2、蒸馏水冲洗，pbs 浸泡5 分钟（如需采用抗原修复，在此步骤后进行）。

3、3%双氧水去离子水（无色液体）孵育15-20 分钟，以消除内源性过氧物酶活性。

4、滴加试剂A（蓝色液体）室温孵育15-20 分钟，倾去，勿洗。

5、滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2-3 小时或4℃过夜。

6、PBS 冲洗，3 分钟3 次。

7、滴加试剂B（黄色液体），室温或37℃孵育15-20 分钟。

8、PBS 冲洗，3 分钟3 次。

9、滴加试剂C（橙色液体），室温或37℃孵育15-20 分钟。

10、PBS 冲洗，3 分钟3 次。

11、显色剂显色（DAB 或AEC）

12、自来水充分冲洗。

13、如果需要，可进行复染，脱水，透明。

14、选择适当的封片剂封片。

抗体分子标记技术：

（一）原理

当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所**的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。

（二）准备

1.试剂

经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体；0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5；无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5）；胺T反应终止缓冲液；

2.仪器

凝胶过滤柱；￥-记数器；玻璃纤维滤。

（三）操作要点

1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行；

2.如果氧化反应损伤蛋白质，可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m，并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年；

4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天）；

5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。

抗体的种类：

抗体是在抗原刺激下产生的，体液性抗体由B淋细胞系产生。根据其化学结构和抗原的不同可分为IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5种类型.目前对疫球蛋白G、A、M、E了解较多，对D的功能了解较少。

（1） IgG：是血清中浓度大的一类球蛋白，约占疫球蛋白含量的70～80%，50%分布于血浆。机体受到抗原初次刺激后，其产生时间仅次于IgM。在抗体介导的抗感染免中起主要作用。IgG是球蛋白单体，分子量16万～18万，可以通过兔的胎盘，但不能通过猪和牛的胎盘。在体内可以有效地抵抗**、病毒等微生物侵袭。在体外的血清学反应中，参与沉淀反应、凝集反应、补体结合反应和中和反应。

（2） IgM：由5个球蛋白单位组成的五聚体，在血清中的含量仅次于IgG，分子量90万，是体内大的球蛋白。抗原初次刺激机体后，IgM出现早,在血清中的含量仅次于IgG，主要分布在血管内，可以通过激活补体发挥溶菌、溶细胞及中和病毒的作用。因其是五聚体，免作用很强，是IgG的100倍，但由于含量仅为IgG的1/10，且持续时间短，所以在抗感染疫中不能起主要作用。在体外的血清学反应中，参与凝集反应和补体结合反应。

（3） IgA：有单体和双体两种形式。单体存在于血清中，分子量约为17万，亦称为血清型IgA，有**和抗病毒作用。双体主要存在于外分泌液中，如唾液、泪液、初乳、气管分泌液，以初乳中的含量高。双体IgA亦称为分泌型IgA，由存在于粘膜和组织上的浆细胞产生，分子量40万，含量较单体高6～８倍，是粘膜的重要防御因素，可以阻止**或病毒吸附于粘膜表面。

（4） IgE：是一种特殊的糖蛋白，为单位体结构，分子量19万，由消化道、呼吸道粘膜固有层及局部结中的浆细胞所形成，在血清中含量甚微，是一种致敏抗体，容易吸附在**表面，当与相应抗原结合所引起过敏反应。在机体抵抗**和病毒的感染中几乎无作用。

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