抗体反应特点:
1.高度特异性,特异性是抗原抗体反应的主要特征,特定抗原决定簇只与特定抗体结合;
2.可逆性:抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡, 其反应式为:Ag+AbAg·Ab;
3.适当浓度和比例;
4.敏感性:在测定血清中某一物质的含量时,化学比色法的敏感度为mg/ml水平,酶反应测定法的敏感度约为5~10μg/ml,定中凝胶扩散法的敏感度与酶反应法相仿。
抗体反应的因素:
1.电解质 :抗原抗体特异结合后,胶体粒便可发生脱水作用,此时易受电解质影响,如有适当浓度的电解质存在就会使它们失去部分负电荷而相互凝聚,于是出现明显的凝集或沉淀现象。
2.酸碱度:合适的pH为6-8。
3.温度:37℃通常是抗原体反应温度。
别 名 AARE; ACPH; Acyl peptide hydrolase; Acylamino acid releasing enzyme; Acylaminoacyl peptidase; APEH; APH; D3F15S2; D3S48E; DNF15S2; N acylaminoacyl peptide hydrolase; OPH; Oxidized protein hydrolase; ACPH_HUMAN.
英文名称 Anti-AARE
中文名称 氧化蛋白质水解酶
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
产品类型 一抗
研究领域 肿瘤 细胞生物 **学
蛋白分子量 predicted molecular weight: 81kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human AARE
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
亚 型 IgG
本公司产品仅用于科研实验。
抗体的荧光标记法:
(一)基本原理
赖氨酸残基的游离e-氨基可与FITC(其激发波长为492nm,发射光波长为525nm)共价结合。与FITC结合的抗体可用为特异性的探针,以测定细胞相应抗原的存在。FITC具有很高的量子产量(发射光与吸收光的比值,0.85)形成的偶联物的稳定性很好。
(二)仪器和试剂
1.待偶联抗体;
2.碳酸氢钠缓冲液;
3.叠氮钠;
4.庵氰酸荧光素;
5.电磁搅拌器。
实验步骤:
1、石蜡切片,常规脱蜡至水
2、蒸馏水冲洗,pbs 浸泡5 分钟(如需采用抗原修复,在此步骤后进行)。
3、3%双氧水去离子水(无色液体)孵育15-20 分钟,以消除内源性过氧物酶活性。
4、滴加试剂A(蓝色液体)室温孵育15-20 分钟,倾去,勿洗。
5、滴加适当比例稀释的一抗,37℃孵育2-3 小时或4℃过夜。
6、PBS 冲洗,3 分钟3 次。
7、滴加试剂B(黄色液体),室温或37℃孵育15-20 分钟。
8、PBS 冲洗,3 分钟3 次。
9、滴加试剂C(橙色液体),室温或37℃孵育15-20 分钟。
10、PBS 冲洗,3 分钟3 次。
11、显色剂显色(DAB 或AEC)
12、自来水充分冲洗。
13、如果需要,可进行复染,脱水,透明。
14、选择适当的封片剂封片。
抗体分子标记技术:
(一)原理
当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所**的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
(二)准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体;0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5;无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5);胺T反应终止缓冲液;
2.仪器
凝胶过滤柱;¥-记数器;玻璃纤维滤。
(三)操作要点
1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行;
2.如果氧化反应损伤蛋白质,可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m,并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年;
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天);
5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
抗体的种类:
抗体是在抗原刺激下产生的,体液性抗体由B淋细胞系产生。根据其化学结构和抗原的不同可分为IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5种类型.目前对疫球蛋白G、A、M、E了解较多,对D的功能了解较少。
(1) IgG:是血清中浓度大的一类球蛋白,约占疫球蛋白含量的70~80%,50%分布于血浆。机体受到抗原初次刺激后,其产生时间仅次于IgM。在抗体介导的抗感染免中起主要作用。IgG是球蛋白单体,分子量16万~18万,可以通过兔的胎盘,但不能通过猪和牛的胎盘。在体内可以有效地抵抗**、病毒等微生物侵袭。在体外的血清学反应中,参与沉淀反应、凝集反应、补体结合反应和中和反应。
(2) IgM:由5个球蛋白单位组成的五聚体,在血清中的含量仅次于IgG,分子量90万,是体内大的球蛋白。抗原初次刺激机体后,IgM出现早,在血清中的含量仅次于IgG,主要分布在血管内,可以通过激活补体发挥溶菌、溶细胞及中和病毒的作用。因其是五聚体,免作用很强,是IgG的100倍,但由于含量仅为IgG的1/10,且持续时间短,所以在抗感染疫中不能起主要作用。在体外的血清学反应中,参与凝集反应和补体结合反应。
(3) IgA:有单体和双体两种形式。单体存在于血清中,分子量约为17万,亦称为血清型IgA,有**和抗病毒作用。双体主要存在于外分泌液中,如唾液、泪液、初乳、气管分泌液,以初乳中的含量高。双体IgA亦称为分泌型IgA,由存在于粘膜和组织上的浆细胞产生,分子量40万,含量较单体高6~8倍,是粘膜的重要防御因素,可以阻止**或病毒吸附于粘膜表面。
(4) IgE:是一种特殊的糖蛋白,为单位体结构,分子量19万,由消化道、呼吸道粘膜固有层及局部结中的浆细胞所形成,在血清中含量甚微,是一种致敏抗体,容易吸附在**表面,当与相应抗原结合所引起过敏反应。在机体抵抗**和病毒的感染中几乎无作用。
荧光素标记人类疱疹病毒8抗体IgG 规格: 0.2ml Anti-HHV8/ORF50/FITC
荧光素标记人类状瘤病毒16抗体IgG 规格: 0.2ml Anti-HPV16-E6/E6 protein/FITC
荧光素标记干扰素诱导跨膜蛋白1抗体IgG 规格: 0.2ml Anti-IFITM1/FITC
荧光素标记磷酸化核因子κB激酶gamma抑制剂抗体IgG 规格: 0.2ml Anti-phospho-IKK gamma (Ser376)/FITC
荧光素标记白介素-17D抗体IgG 规格: 0.2ml Anti-IL-17D/IL-27/FITC
荧光素标记巨噬表面分子/整合素-α2抗体IgG 规格: 0.2ml Anti-Integrin AlphaM/CD11b /FITC
荧光素标记抗亮氨酸脑啡肽抗体IgG 规格: 0.2ml Anti-L-enk/FITC
荧光素标记磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗体IgG 规格: 0.2ml Anti-Phospho-Jak3 (Tyr785)/FITC
荧光素标记肝脏型脂肪酸结合蛋白抗体IgG 规格: 0.2ml Anti-LFABP/FABP-1 /FITC
荧光素标记白三烯B4受体2抗体IgG 规格: 0.2ml Anti-LTB4-R2/FITC
荧光素标记软骨基质蛋白抗体IgG 规格: 0.2ml Anti-Matrilin 1/CMP/FITC
大豆慢生根瘤 Bradyrhizobium japonicum卵巢
莫格球拟酵母 Torulopsis mogii植物杆 Lactobacillus plantarum
苜蓿中华根瘤 Sinorhizobium melilotiLLC(小鼠肺)
30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液(29:1)酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
亚侧耳 Hohenbuehelia serotina三七根腐病 Fusarium solani
黑化大家鼠肺成纤维样绿色木霉 Trichoderma viride
MCF-7 [MCF7], 人腺系宇佐美曲霉变种 Aspergillus usamii var.
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae费氏中华根瘤 Sinorhizobium fredii
人前列腺平滑肌完全培养基黑曲霉 Aspergillus niger
豹皮香菇 Lentinus lepideusP19(小鼠畸胎瘤)
氧化蛋白质水解酶质量规格:HPLC≥98%,标准品LCysteinemethylesterhydrochloride
质量规格:HPLC≥98%,标准品4,4′Dihydroxybenzophenone,99%
质量规格:HPLC≥98%,标准品5Chloro2(methylamino)benzophenone,99%
质量规格:HPLC≥98%,BR2,6Dimethylγpyrone,≥99.0%
质量规格:HPLC≥98%,标准品2,7Dibromo9fluorenone,96%
质量规格:HPLC≥98%,BRDi(2pyridyl)ketone,99%
质量规格:HPLC≥98%,标准品4,4′Dihydroxybenzophenone,95%
质量规格:>97%,BR5Chloro1indanone,99%
质量规格:HPLC≥98%,标准品4Methylthio4methyl2pentanone,≥98%
质量规格:HPLC≥98%,标准品4,4′Dihydroxybenzophenone,99%
质量规格:HPLC≥98%,标准品2Methyltetrahydrothiophen3one,≥97%
质量规格:HPLC≥98%,标准品2,5Dimethyl3(2H)Furanone,99%
质量规格:HPLC>95%,BR4′Hydroxyvalerophenone
质量规格:>85%,BR2,3:4,5DiOisopropylideneβDfruct...
质量规格:HPLC≥98%,标准品(S)(+)Carvone,96%