产品名称:大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒
货号:BH-P64468
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. 特异性高,引物是根据高度保守区设计,不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(*好用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
EV71(Human eerovirus 71)VP1(CT) 肠道病毒71型/手足口病病毒抗原(C端)Multi-class aibodies: 0.5mg
p53正向细胞凋亡调控因子抗体 Ai-BBC3/PUMA 0.1ml
Rhesus aibody Rh phospho-EGFR (Ser1190) 磷suan化表皮生长因子受体抗体 0.1ml
DMEM高糖(含suan钠) 10×1L Gibco
ZNF843 英文名称: 锌指蛋白843抗体 0.2ml
Dystrobrevin alpha 英文名称: 肌营养蛋白α抗体 0.2ml
p53正向细胞凋亡调控因子抗体 Ai-BBC3/PUMA 0.1ml
PENK/Enkephalin A(Preproencephalin A) 脑啡肽Multi-class aibodies: 0.5mg
Ai-ATP7B 铜转运蛋白质β链抗体Multi-class aibodies: 0.1ml
Rhesus aibody Rh phospho-AMPK alpha 1(Thr172) 磷suan化腺单磷suan活化蛋白激meiα1抗体 0.1ml
P15INK4b 浓缩液 0.1ml 进口分装
UBOX5 英文名称: 泛su结合mei7相互作用蛋白5抗体 0.2ml
DEDD2 英文名称: 死亡效应结构域蛋白2抗体 0.2ml
Ai-ATP7B 铜转运蛋白质β链抗体Multi-class aibodies: 0.1ml
5T4 英文名称: 滋养层细胞糖蛋白5T4抗体 0.2ml
Ephrin A1 Receptor 英文名称: 肝配蛋白A1受体抗体 0.2ml
运动神经元存活蛋白结合蛋白1抗体 Ai-SIP1 0.2ml
Ai-TEM8/FITC 荧光su标记血管内皮标志物8抗体IgGMulti-class aibodies: 0.2ml
Rhesus aibody Rh Phospho-Mcl1 (Ser159/Thr163) 磷suan化髓样细胞白血病-1抗体 0.1ml
Melan-A/MART-1 黑色su-A(抗原)Multi-class aibodies: 0.5mg
大肠弯曲杆菌、海鸟弯曲杆菌16S rRNA基因荧光PCR检测试剂盒硫代硫suan钠五水(AR)五加皮 载玻片β脘蛋白(PRION)蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒
化钠(AR)羊胆粉 冻切片组织脘蛋白(PRION)蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒
可溶性淀粉西藏棱子芹 石蜡切片组织脘蛋白(PRION)蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒
硫脲甘青青兰 脘蛋白(PRION)蛋白表达比色法定量检测试剂盒
氯化钴六水(分子生物学级)龙胆(龙胆) 脘蛋白(PRION)蛋白表达荧光定量检测试剂盒
氯化钴六水(AR)母氯法DNA萃取试剂盒
,酚荜澄茄乙沉淀法DNA萃取试剂盒
异戊土鳖虫(地鳖)SDS蛋白meiDNA萃取试剂盒
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。