细胞接收后的处理：
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代。
英文简称
规格
货号
L6:L6
1×106
P-X1136
产品详情：
生长特性
贴壁细胞
细胞形态
成肌细胞样
生长培养基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
推荐传代比例 1:3-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
背景描述 L6成肌细胞是由Yaffe从甲基胆蒽存在下大鼠大腿肌的原代培养物初两代中分离得到。L6细胞在培养基中可融合形成多核的肌管和横纹肌纤维。L6细胞融合的程度随着代数的增加而下降；因而，L6细胞应冷冻于低代次阶段并周期性地重新克隆以选择融合能力强的细胞。如果让培养容器中的细胞长满，L6细胞的成肌组分将迅速耗尽。
组织来源
骨胳肌；成肌细胞
细胞类型
转化细胞系
生物等级 1
基因表达情况 myosin
保藏机构 ATCC; CRL-1458 BCRJ; 0141
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1）准备DMEM培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理：
公司正在出售的产品：
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eIF2Bγ蛋白抗体 EIF2B3 |
衰老相关Sigma受体蛋白抗体 OPRS1 |
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FAM126B蛋白抗体 FAM126B |
组蛋白去乙酰化酶6重组兔单克隆抗体 HDAC6 |
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磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶MARK1抗体 phospho-MARK1 (Thr215) |
PE标记人CD269 (BCMA)单克隆抗体 human CD269 (BCMA)/PE |
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磷酸化血管生成素受体2抗体 Phospho-Tie2 (Tyr992) |
PE-Cy5标记小鼠CD44单克隆抗体 mouse CD44/PE-Cy5 |
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17β羟类固醇脱氢酶7抗体 HSD17B7 |
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶SRPK2抗体 SRPK2 |
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红细胞蛋白Ank1抗体 Ankyrin-1 |
雄受体单克隆抗体 |
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环指蛋白70抗体 RNF70 |
促甲状腺素β亚单位抗体 TSHB |
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锌指蛋白93抗体 ZNF93 |
蛋白BOC抗体 Protein BOC |
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NADP磷酸酶（NADPase）测试盒 |
ENOX1蛋白抗体 ENOX1 |
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小鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)elisa检测试剂盒 |
FAM19A3蛋白抗体 FAM19A3 |
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大鼠硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)elisa检测试剂盒 |
磷酸化糖原合酶激酶3β抗体 phospho-GSK-3 Beta (Ser21) |
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细胞INSULIN R-ALPHA 蛋白表达荧光定量检测试剂盒 |
磷酸化转录中介因子Tif1β抗体 phospho-TRIM28 (Ser473) |
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小鼠葡萄糖激酶(GCK)elisa分析检测试剂盒 |
细胞肌酸激酶工酶混合型（CK-MB）活性比色法定量检测试剂盒 |
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大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)elisa检测试剂盒 |
L6大鼠成肌细胞人肝脏甘油三脂脂肪酶(HTGL)elisa检测试剂盒免费代测 |
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犬CC趋化因子受体2(CCR2)elisa分析检测试剂盒 |
小鼠骨胶原交联(Cr)elisa分析检测试剂盒 |
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植物丙二醛（MDA）比色法定量检测试剂盒 |
大鼠白介素2（IL－2）elisa检测试剂盒 |
实验步骤：
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上，利用293T细胞进行慢病毒包装，获得含目的基因的慢病毒；
2 转染前24 h进行细胞铺板，转染时细胞密度控制在80%左右；
3 天加入适量病毒悬液感染细胞，并置于37 ℃，5% CO2培养箱中孵育；
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基，并继续培养；
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养，直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%，获得稳转细胞系。
