产品名称：霍乱弧菌01和0139群荧光PCR检测试剂盒
货号：BH-P64477
服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。
实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（*好用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
Ai-phospho-JNK1/2(pThr183/pTyr185)/FITC 荧光su标记抗磷suan化氨基末端激mei1/2抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml
Rabbit Ai-human IgM/Gold 金标记兔抗人IgM (10nm/15nm)Multi-class aibodies： 0.5ml
Fe65 蛋白抗体 Ai-Fe65 protein 0.2ml
Rabbit Ai-Guinea pig IgM/PE-Cy3 PE-Cy3标记的兔抗豚鼠IgM 0.1ml
FOXD1 英文名称： 叉头蛋白D1抗体 0.2ml
Rhesus aibody Rh phospho-SYN1(Ser62+Ser67) 磷suan化神经突触su1抗体 0.1ml
Rabbit Ai-human IgM/Gold 金标记兔抗人IgM (10nm/15nm)Multi-class aibodies： 0.5ml
MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor) 层粘连蛋白受体1抗体Multi-class aibodies： 0.5mg
Ai-beta-Amyloid(1-28) β淀粉样肽(1-28)抗体Multi-class aibodies： 0.1ml
Rhesus aibody Rh Phospho-BLNK(Tyr491) 磷suan化T细胞连接蛋白抗体 0.1ml
多聚赖suan溶液0.1%(Poly-L-Lysine)10X 10ml 组化用
Vimein 英文名称： 波形蛋白抗体 0.1ml
DNAH7 英文名称： 轴丝动力蛋白7抗体 0.2ml
Ai-beta-Amyloid(1-28) β淀粉样肽(1-28)抗体Multi-class aibodies： 0.1ml
mSin3A 英文名称： 同源转录调节蛋白Sin3A抗体 0.2ml
EPOR 英文名称： 红细胞**su受体抗体 0.1ml
新的抑癌基因Brg1抗体 Ai-Brg1 0.1ml
Ai- Beta-Actin/HRP 辣根过氧化物mei标记β-肌动蛋白(抗体)Multi-class aibodies： 0.2ml
Rhesus aibody Rh phospho-IFNAR1(Ser535+Ser539) 磷suan化干扰suα受体抗体 0.1ml
Cav-1/ETM1 peptide 细胞质膜微囊蛋白-1抗原Multi-class aibodies： 0.5mg
霍乱弧菌01和0139群荧光PCR检测试剂盒D-葡糖糖-6-磷suan二钠二水克拉维suan3’端衔接体（LINKER）连接试剂盒
亚硫suan氢钠(AR)舒巴坦适配体（ADAPTER）连接试剂盒
丁二suan钠(AR)羟氨苄钙转试剂盒
氯化铜二水(AR)林可霉su通用型CHIP DNA分子克隆试剂盒
牛血红蛋白甲砜霉su通用型CHIP DNA分子库构建试剂盒
乙suan钠双氢苯甘氨suan高效CHIP DNA分子克隆试剂盒
聚乙二10000α-对羟基苯甘氨suan高效CHIP DNA分子库构建试剂盒
DL-苹果suan氯霉su二物10倍PCR完全缓冲液
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
